【摘 要】
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目的探讨折布拉林对食管癌细胞凋亡的影响及其机制。方法选用食管癌细胞ECA109和KYSE170,通过CCK-8法检测细胞活力确立折布拉林的最适作用浓度和最适作用时间,以此干预细胞,流式细胞术检测凋亡率,Western blot检测凋亡蛋白（Bcl-2蛋白、Bax蛋白、cleaved-caspase-3蛋白和cleaved-PARP蛋白）和wingless-related integration s
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目的探讨折布拉林对食管癌细胞凋亡的影响及其机制。方法选用食管癌细胞ECA109和KYSE170,通过CCK-8法检测细胞活力确立折布拉林的最适作用浓度和最适作用时间,以此干预细胞,流式细胞术检测凋亡率,Western blot检测凋亡蛋白（Bcl-2蛋白、Bax蛋白、cleaved-caspase-3蛋白和cleaved-PARP蛋白）和wingless-related integration site（Wnt）信号通路分子（β-catenin蛋白、cyclin D1蛋白和c-Myc蛋白）的表达量,实时荧光定量PCR检测Wnt信号通路上游负调控基因表达水平,甲基化特异性PCR（methylation specific PCR,MSP）法检测人分泌型卷曲相关蛋白2（secreted frizzled related protein 2,SFRP2）和Dickkopf 3（Dkk3）基因的甲基化状态。敲低SFRP2和Dkk3基因,观察其对折布拉林诱导凋亡的影响。结果折布拉林能抑制ECA109和KYSE170细胞的活力,呈剂量和时间依赖性,折布拉林对细胞抑制率为50%的作用浓度和作用时间分别为100μmol·L-1和48 h;折布拉林可诱导ECA109和KYSE170细胞凋亡,折布拉林作用后ECA109和KYSE170细胞的凋亡率分别为29.68%和23.41%,明显高于对照组的凋亡率（10.64%和12.13%）（P＜0.05）,折布拉林可下调凋亡蛋白Bcl-2,上调Bax、cleaved-caspase-3和cleaved-PARP的表达,并抑制Wnt/β-catenin通路主要蛋白β-catenin、cyclin D1和c-Myc表达,与对照组比较差异明显（P＜0.05）;折布拉林作用后食管癌细胞SFRP2和Dkk3的m RNA表达水平明显升高,SFRP2和Dkk3启动子甲基化水平降低,与对照组相比差异有统计学意义（P＜0.05）;敲低SFRP2和Dkk3基因可降低折布拉林诱导的细胞凋亡,并增加Wnt/β-catenin通路蛋白β-catenin、cyclin D1和c-Myc的表达。结论折布拉林可通过降低SFRP2和Dkk3基因启动子甲基化水平促进SFRP2和Dkk3基因表达,进而抑制Wnt信号通路来诱导食管癌细胞凋亡。图10幅;表2个;参107篇。
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