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[目的]通过对羟基磷灰石(Hydroxyapatite,HA)及其纳米粒子和高密度壳聚糖(High Density Chitosan, HDC)生物相容性研究,探讨生物材料生物相容性评价的方法和指标。[材料和方法]①高温煅烧碾磨法制备HA及溶胶凝胶法制备HA纳米微粒,用扫描电子显微镜、透射电子显微镜(transmission electron microscope, TEM)、能谱仪(energy dispersive spectrometer, EDS)及X射线衍射(x-ray diffraction,XRD)等进行表征及特性检测;②不同浓度和不同时间采用MTT法绘出小鼠结缔组织成纤维L-929细胞的标准曲线图;③通过形态学观察、MTT实验、溶血试验、HA腹腔注射法小鼠LD50检测等方法评价HA的生物相容性;④通过流式细胞(Flow Cytometry,FCM)检测HA、HDC对体外培养小鼠L-929生长的影响;⑤通过单细胞凝胶电泳(Single cell gel electrophoresis, SCGE)检测HA浸提液、HDC浸提液及nHA浸提液对培养的L-929细胞DNA损伤的影响;⑥通过免疫细胞化学(immunocytochemistry,IC)检测HA对L-929细胞P53的表达的影响。[结果]①制备的nHA的表征:扫描电子显微镜发现制备的纳米粒子直径为50nm-88nm,透射电子显微镜发现制备的纳米粒子为圆形、平均粒径50纳米;EDS证实制备的纳米材料只含有H、O、Ca与P四种元素;XRD显示制备的纳米材料的各X射线衍射谱图的特异峰线高度和位置与JCPDS(粉末衍射标准联合会)数据库卡片中的nHA结果一致;②细胞生长标准曲线图显示最佳细胞浓度6000个/孔,最佳时间为72h;③M TT实验示不同浓度HA及HDC材料浸提液具有促进细胞增殖作用与倒置显微镜观察的L-929细胞呈梭形、三角形或不规则形的生长良好结果一致;溶血实验证明HA及HDC无溶血作用,符合生物材料的安全性要求;HA小鼠LD50检测发现其LD509.98g/kg,具有较广的安全值范围,具有良好的生物相容性;④FCM检测显示50%、75%、100%HA浸提液及25%、50%、75%、100%HDC浸提液组能明显增加L-929细胞的S,G2期和M期细胞比例,降低G0和G1期细胞比例,显示其促细胞增殖作用,而25%HA浸提液组结果与阴性相似;FCM检测表明随浸提液浓度的升高,细胞凋亡率逐渐上升;⑤SCGE检测结果显示:随HA及其纳米粒子浸提液浓度的递增,SCGE彗星率逐渐增大;并呈现时间依赖性;HA的相对危险度与HA浸提液浓度和作用时间呈正相关性,提示HA对L-929细胞DNA可能有损伤作用;而HDC对L-929细胞无明显的DNA损伤作用。⑥P53免疫细胞化学实验显示各浓度HA浸提液组P53表达阳性,提示可能HA材料对L-929细胞具有致突变作用。[结论]①成功制备了nHA;②制备的HA及其纳米粒子和HDC具有良好的细胞相容性;③FCM检测可为生物材料的生物相容性评价提供新的方法,有望成为生物材料生物相容性评价研究的重要指标之一;④S CGE检测在DNA水平评价生物材料生物相容性较在细胞水平敏感,可作为生物材料分子生物相容性评价的方法之一,如在细胞水平上能同时结合SCGE检测DNA分子损伤,生物相容性评价在方法学上更为完善,评价的结果更为合理。