背景高钠饮食及盐摄入量超标有着极大的危害,高钠饮食能增加各种心血管疾病发生的风险,并且还能够增加患胃癌的风险,增加肾脏的负担,同时有研究表明高钠饮食能够引起高血压。过多的盐摄入,对健康有极大威胁。Coro1a可能是高度运动细胞的细胞骨架的重要组成部分,在大块质膜的内陷以及参与细胞运动的质膜突起形成时发挥作用。Coro1a在细胞增殖、迁移中也有着重要作用。临床研究报导,Coro1a的突变和功能障碍与免疫功能存在关联,动物实验研究也发现,Coro1a基因可能参与自身免疫病的发生发展。Coro1a是钙依赖并参与信号传导过程的白细胞特异性调节因子,对维持外周初始T细胞至关重要。本研究中,我们将大鼠肠系膜动脉内皮细胞（Mesenteric artery endothelial cells,MAECs）进行高钠处理,通过RNA-seq发现Coro1a的表达量发生显著改变,并且与高钠饮食大鼠血浆蛋白质谱检测结果一致。有研究报导,Coro1a在人脐静脉内皮细胞（Human umbilical vein endothelial cell,HUVEC）中可以通过调节p38β表达和激活来保护内皮细胞免受TNFα诱导的细胞凋亡。基于我们在RNA-seq与血浆质谱中的发现,本课题展开了Coro1a在大鼠MAECs中的作用及机制研究。目的1.通过RNA-seq发现高钠环境下大鼠MAECs的差异表达基因,并与高钠饮食大鼠血浆质谱检测结果进行比对分析,发现关键基因和蛋白。2.验证Coro1a在高钠大鼠MAECs细胞中的表达情况,研究Coro1a对内皮细胞功能调节作用及其机制,为高钠引起的血管内皮损伤提供新的分子机制。方法1.RNA-seq检测高钠处理后差异基因提取大鼠MAECs细胞并进行培养,分别使用102.67 m M、122.67 m M、142.67 m M Na Cl处理24 h后,弃去上清,使用Trizol收集样本检测。2.RNA-seq结果差异分析与高钠饮食大鼠结果比对将122.67 m M、142.67 m M Na Cl处理组分别与102.67 m M Na Cl处理组进行差异分析得到上调差异基因,再与高钠饮食大鼠血浆上调差异蛋白使用维恩图进行交叉分析,最终得到Coro1a关键基因。3.RT-qPCR使用RT-qPCR在m RNA水平验证高钠处理后Coro1a在MAECs中的表达情况。4.原代细胞培养和鉴定提取并培养大鼠MAECs细胞,使用v WF抗体验证原代培养的细胞是否为内皮细胞。5.蛋白免疫印迹实验蛋白免疫印迹实验用于检测Coro1a蛋白的表达情况。NO荧光探针使用NO荧光探针标记各组细胞内NO产物,使用Flexstation多功能酶标仪检测NO荧光。6.细胞划痕细胞融合度达到100%后,进行划痕,使用无血清培养基培养,观察不同处理组之间细胞迁移率。7.细胞增殖转染后将细胞接种于96孔板中,加Na Cl处理24 h后使用CCK-8试剂检测细胞增殖。结果1.RNA-seq结果中上调基因与高钠饮食大鼠血浆质谱上调基因比对得到Coro1a这一关键基因。2.高钠处理MAECs 24 h后,RT-qPCR与蛋白免疫印迹结果显示Coro1a在高钠条件下表达显著升高。3.高钠处理MAECs 12 h后,大鼠MAECs迁移能力增强,24 h后无明显变化,敲低Coro1a后高钠处理12 h正常组细胞增殖能力增强,24 h后高钠与Coro1a si RNA同时处理细胞迁移能力减弱。4.MAECs细胞在高钠环境下24 h细胞合成的NO量减少,使用si RNA敲低Coro1a后MAECs中NO合成显著减少。5.高钠环境下处理24 h细胞增殖减弱,Coro1a敲低后对细胞增殖无显著影响。结论Coro1a在高钠环境下的内皮细胞中与高钠饮食大鼠血浆中都升高。并且经我们的研究发现,Coro1a能够调节内皮细胞迁移和NO合成,为高钠饮食引起的血管内皮损伤提供了新的分子机制。