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目的:研究转化生长因子β1(TGF-β1)和基质金属蛋白酶2(MMP-2)在大鼠行显微血管吻合术后动脉中膜平滑肌细胞中的动态表达,探讨它们与受损处血管平滑肌细胞增生、迁移以及细胞外基质代谢沉积的关系,为术后预防和治疗吻合口栓塞、血管再狭窄寻找新的作用靶点。
方法:48只雄性Wistar大鼠,颈部正中切口,分离并切断右侧颈动脉,建立显微动脉全层损伤的动物模型,手术显微镜下重新行血管吻合。将手术后大鼠随机分为四组,分别于术后3、7、10、14天收获血管。同时取大鼠对侧正常血管做对照。每组中4条血管用于组织形态学HE染色,光镜下观察形态变化并测量不同时间点吻合口处的血管内膜和中膜厚度;剩余8条血管应用免疫组织化学的方法,分别检测平滑肌细胞中TGF-β1和MMP-2蛋白的动态表达。显微镜下观察结果,统计阳性细胞表达率。
结果:1.组织形态学观察:术后7天血管内膜明显增厚,测量结果与对照组相比有统计学差异(t=10.218,P<0.01);术后14天时内膜增厚达到高峰(t=19.309,P<0.01)。
2.免疫组织化学染色:TGF-β1蛋白在术后3天开始增加(++),与对照组相比,差异有统计学意义(x2=46.62,P<0.01);第7天达到高峰(+++);术后14天呈现下降趋势,与第7天组相比,差异有统计学意义(x2=14.65,P<0.05)。
3.免疫组织化学染色:MMP-2蛋白在正常动脉血管平滑肌细胞中呈现基础表达(+);术后第3天MMP-2表达明显增高(+++)(x2=52.27,P<0.01);术后7天组,蛋白表达呈现逐渐减少的趋势(+++~++);术后10天组及术后14天组表达进一步降低为(++),与术后3天组相比,差异有统计学意义(x2=6.95,P<0.05)。
结论:1.TGF-β1在调节血管平滑肌细胞的增殖和迁移、促进细胞外基质的代谢沉积中发挥着重要的作用,其表达变化与损伤血管内膜的增生有着密切的关系。
2.MMP-2作为细胞外基质的主要降解酶之一,可以降解Ⅳ型基底膜胶原,在术后早期平滑肌细胞大量由中膜向内膜迁移的过程中发挥着重要的始动作用。
3.TGF-β1和MMP-2可以作为重要的作用靶点,可通过对它们及其受体进行干预,以对抗血管吻合口的增生,预防和治疗吻合口的再狭窄,提高手术疗效。