染色体微分离及微克隆技术是连接经典遗传学与细胞遗传学的重要桥梁,在动植物的遗传、发育和进化等各方面研究中正发挥着越来越重要的作用。本研究以杨树花粉母细胞为材料,对Leica LMD 6000激光显微分离系统的杨树染色体样本的制备、切割分离与收集,以及染色体体外扩增和AFLP分子标记技术进行了研究,并取得了一定进展。1.解决了激光显微分离系统染色体样本制备的难题,使杨树花粉母细胞减数分裂染色体激光显微分离成为可能。针对激光显微分离系统需要在聚乙烯奈(Polyethylene Naphthalene, PEN)或聚酯(Polyester, POL)膜上制备染色体样本的难题,试验了多种制片方法,证明以高温热击法制成的杨树花粉母细胞减数分裂染色体样本效果最好,染色体在细胞内分布均匀且清晰可辨,非常适合染色体激光显微分离。2.采用Leica LMD 6000激光显微分离系统成功地分离了加杨花粉母细胞减数分裂终变期染色体,为开展杨树分子细胞遗传学研究提供一个重要的手段。经反复试验表明,当激光输出能量值为80-110,速度值为2-5时,能取得较好的切割效果,并成功切割分离了花粉母细胞减数分裂终变期与核仁相连的1-4对二价体等。3.初步进行了激光显微切割系统分离的杨树染色体的分子生物学研究。通过采用Sau3AⅠ酶酶切、LA-PCR体外扩增以及AFLP分子标记分析,发现染色体扩增产物的AFLP表现出明显的多态性；将特异AFLP片段分离、纯化、克隆、测序,在Genbank数据库中进行BLAST分析,结果显示与毛果杨的同源性很低。其原因有待进一步研究。