苏云金芽胞杆菌MEP代谢途径相关基因的转录调控研究

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苏云金芽胞杆菌(Bacillus thuringensis,Bt),是一种革兰氏阳性细菌,在生成芽胞的同时还产生对多种农林害虫有杀虫活性的伴胞晶体,是应用最广的微生物杀虫剂。萜类化合物广泛分布在生物界,是重要的生命物质。目前发现有两条萜类化合物的生物合成途径,即甲羟戊酸(MVA)途径和2-甲基-D-赤藓糖醇-4-磷酸(MEP)途径。Bt中有8个基因编码MEP代谢途径相关的酶,本文对这些基因的转录调控进行研究。主要取得了如下结果:生物信息学分析发现,Bt中有8个基因编码MEP代谢途径相关的酶,它们是:dxs基因(HD734479)编码1-脱氧-D-木酮糖-5-磷酸合酶,dxr基因(HD733605/dxr1和HD734104/dxr2)编码1-脱氧-D-木酮糖-5-磷酸还原异构酶,ispD(HD730085)基因编码2-C-甲基-D-赤藓醇-4-磷酸胞苷转移酶,ispE(HD730043)基因编码4-胞啶-2-C-甲基-D-赤藓醇激酶,ispF(HD730086)基因编码2-C-甲基-D-赤藓醇-2,4-二磷酸合成酶,ispG(HD734584)基因编码4-羟基-3-甲基-2-烯基二磷酸合酶,ispH(HD734593)基因编码4-羟基-3-甲基-2-烯基二磷酸还原酶,fni(HD731728)基因编码异戊烯二磷酸异构酶。这些基因在枯草芽胞杆菌中都有同源基因。通过RT-PCR和5’RACE实验,确定了dxs基因与其下游基因形成一个转录单元,转录起始位点(TSS)位于dxs的起始密码子GTG上游133bp处的G碱基;dxr1(HD733605)基因单独形成一个转录单元,TSS位于dxr1的起始密码子ATG上游39 bp处的G碱基;dxr2(HD734104)基因与其上下游的9个基因形成一个转录单元,TSS位于所在基因簇第一个基因(HD734110)的起始密码子ATG上游116 bp处的G碱基;ispD和ispF基因所在的基因簇由5个基因组成,形成一个转录单元,TSS位于所在基因簇第一个基因(HD730084)的起始密码子ATG上游11bp处的G碱基;ispE基因与其上下游的3个基因形成一个转录单元,TSS位于所在基因簇第一个基因(HD730041)的起始密码子ATG上游138 bp处的G碱基;ispG基因所在的基因簇由3个基因组成,形成一个转录单元,TSS位于所在基因簇第一个基因(HD734582)的起始密码子ATG上游25 bp处的A碱基;ispH基因与其上游基因形成一个转录单元,TSS位于所在基因簇第一个基因(HD734592)的起始密码子ATG上游24 bp处的A碱基;fni基因与其上游基因形成一个转录单元,TSS位于所在基因簇第一个基因(HD731727)的起始密码子ATG上游76 bp处的C碱基。构建了MEP代谢途径相关基因的启动子融合lacZ报告基因的表达载体,并在Bt HD73菌株中测定了β-半乳糖苷酶活性,结果表明:在SSM培养基中,从T1到T8时期这些启动子都有转录活性。转录活性分析表明,dxr1基因的转录受SigH控制。dxr1或dxr2基因的缺失对菌体生长、芽胞形成率和Cry1Ac蛋白产量无显著影响,但使DXR活性下降。
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