URG11在乳腺癌中的表达及其生物学特性分析的研究

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目的:  1.明确URG11在乳腺癌组织和乳腺癌细胞系中的mRNA及蛋白表达情况。  2.探讨体外过表达URG11对乳腺癌细胞的增殖及迁移的影响。  方法:  1.免疫组织化学方法检测URG11在乳腺癌及癌旁组织中的表达情况,并分析其表达差异与乳腺癌患者临床病理资料之间的关系。  2. Q-PCR和Western blot分别检测乳腺癌癌组织与其相应癌旁组织URG11的mRNA及蛋白表达情况,并分析其表达差异与乳腺癌患者临床病理资料之间的关系。  3. Q-PCR和Western blot分别检测五种乳腺癌细胞系和永生化乳腺上皮细胞中URG11的mRNA及蛋白的表达情况。  4.将乳腺癌细胞转染URG11过表达慢病毒后,进行转染细胞的稳定筛选并克隆化,从蛋白水平鉴定URG11过表达慢病毒组和阴性对照组的细胞转染表达率。  5. URG11过表达慢病毒稳定转染乳腺癌细胞过表达后,采用克隆形成实验检测乳腺癌细胞的克隆形成能力;采用CCK-8法绘制转染细胞的生长曲线检测乳腺癌细胞的增殖能力。  6. URG11过表达慢病毒稳定转染乳腺癌细胞过表达后,采用Transwell小室迁移实验检测乳腺癌细胞的体外迁移能力。  结果:  1. URG11在乳腺癌组织中的表达  免疫组织化学分析检测87对乳腺癌和癌旁组织染色结果显示,URG11在乳腺癌中的阳性表达率是39.08%(34/87),在癌旁中的阳性表达率是60.92%(53/87),并且其在乳腺癌旁组织中的表达明显强于其在乳腺癌组织中的表达。Q-PCR和Western blot检测到URG11在58对乳腺癌组织中的阳性表达率是20.69%(12/58), 在癌旁中的阳性表达率是为79.31%(46/58)。  2.URG11在乳腺癌细胞系中的表达  Western blot结果显示,在永生化乳腺上皮细胞系中表达水平高于5种乳腺癌细胞系的表达。BT474乳腺癌细胞有弱表达,其余乳腺癌细胞系均不表达。  3.URG11对乳腺癌细胞体外生长的影响  克隆形成实验和CCK-8实验均显示,过表达URG11后,实验组细胞的体外增殖能力弱于阴性对照组;Transwel迁移测定结果显示,过表达URG11后,实验组细胞的体外迁移能力弱于阴性对照组。  结论:  URG11在乳腺癌癌组织和癌细胞中低表达并且抑制乳腺癌细胞的体外增殖和迁移。URG11可以作为乳腺癌抑制因子,为乳腺癌患者的早期诊断和预后标记检测提供新的合适靶点。
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