家蚕丝素蛋白具有独特的理化性能和良好的生物相容性,已经被广泛研究作为组织修复用生物材料。但未经交联的丝素材料易溶于水,这就限制了丝素蛋白在生物医学中的应用。目前国内外有许多关于改善丝素材料耐水性的报道,但是在提高丝素材料性能的同时往往对其生物相容性产生一定的负面影响。京尼平是栀子苷经β-葡萄糖苷酶水解后的产物,具有良好的生物相容性。本文用京尼平作为交联剂制备再生丝素蛋白材料,同时对交联之后丝素材料的结构和理化性能进行系统的研究,并探讨了不同方法制备的交联丝素膜与L929细胞的相容性。用流延法制备京尼平交联的丝素膜。热水溶失率的测试结果表明交联膜的耐水性得到显著改善,同时氨基酸分析、红外光谱的结果表明交联后丝素膜中赖氨酸含量减少,并出现了新的共价键,说明京尼平能够与丝素蛋白发生反应,形成新的共价键从而有效地交联丝素蛋白。用红外光谱、X-射线衍射、热分析等手段研究了交联前后丝素膜结构的变化,结果表明交联后的丝素膜中无定形结构减少,聚集态结构趋于规整化,结晶度增大,热稳定性提高。膜的交联度随着京尼平添加量的增加有所提高。丝素膜经过京尼平交联后,其力学性能没有发生明显变化。本文还研究了反应温度和添加甘油对交联膜结构和性能的影响,试验结果表明反应温度和甘油添加量对交联膜的热水溶失率影响不大;随着反应温度的升高和甘油的增加,交联膜的结构趋于规整化,热稳定性提高;升高温度能够提高交联膜的交联度,而对交联膜的力学性能没有明显影响;甘油的添加能够显著提高交联膜的断裂伸长率,降低其杨氏模量,降低了交联膜的脆性。用京尼平作为交联剂,冷冻干燥法制备多孔材料。研究表明,经京尼平交联后丝素多孔材料的热水溶失率明显降低。红外光谱测试结果表明交联后的多孔材料中出现了新的共价键;交联后的丝素多孔材料仍以无定形结构为主,但多孔材料结构规整度稍有提高。热分析结果表明交联后多孔材料的热稳定性稍有提高。多孔材料的孔径随着丝素溶液浓度的增大和冷冻温度的降低而减小,孔密度增大。通过体外细胞培养,研究了L929细胞在京尼平交联的丝素膜上的粘附和生长状态,并与四种丝素膜(乙醇处理丝素膜、30%、60%环氧树脂交联丝素膜、1%戊二醛交联丝素膜)进行对比。用荧光倒置显微镜观察了细胞生长状态,测定细胞黏附率,使用MTT比色法和考马斯亮蓝染色法测定细胞活力,用细胞流式仪测定细胞凋亡与细胞周期。结果表明这几种丝素膜均能够支持细胞的黏附和增殖,20%京尼平交联的丝素膜上细胞的活力与乙醇处理丝素膜上的细胞活力相比无显著性差异,好于其他各交联组。20%京尼平交联的丝素膜的细胞凋亡率和细胞周期结果与乙醇处理丝素膜相比无显著性差异,优于其它交联组,无明显的细胞毒性。