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[背景及目的]急性早幼粒细胞白血病(acute promyelocytic leukemia, APL)是急性髓细胞性白血病(acute myelocytic leukemia, AML)的特殊亚型,约98%的APL患者具有特征性的t(15；17)(q22；q21)易位及PML-RARα致病融合基因。全反式维甲酸(all-tranic retinoic acid, ATRA)和/或砷剂(特别是三氧化二砷,asenic trioxide, ATO)成功诱导APL细胞分化或凋亡是白血病治疗领域靶向治疗的有力例证,使APL从高危白血病成为真正意义上可以治愈的一种白血病,而维甲酸耐药是部分APL诱导治疗失败的根源。本课题组前期研究发现一定浓度的葛根总黄酮(Puerariae radix flavones, PRF)对NB4细胞有增殖抑制作用,其作用机制与调节细胞内外凋亡途径中相关分子有关,如上调NB4细胞的FasL、Caspase8蛋白,Caspase3蛋白表达,激活JNK, PARP,下调p38MAPK水平,下调PML/RARa的表达。进一步研究发现较低浓度的PRF(10、30、50gg/ml)联合1μM ATO处理NB4细胞也存在不同程度的增殖抑制作用,PRF联合1μM ATO上调NB4细胞中JNK表达。基于课题组上述良好研究结果,本课题以低剂量PRF(0、10、30、50μg/m1)联合lμM ATO体外处理维甲酸耐药细胞株NB4-R1,初步探讨低剂量PRF联合ATO对NB4-R1细胞增殖及凋亡的影响。[方法]采用(0、10、30、50μg/ml)PRF联合1μM ATO处理NB4-R1细胞24、48、72小时,MTT法检测细胞增殖抑制率；光学显微镜及荧光显微镜观察细胞形态改变；流式细胞仪检测细胞周期变化；FITC-AnnexinV/PI双染法检测细胞凋亡率,蛋白印迹法检测凋亡相关蛋白表达变化。[结果]1.一定浓度PRF对NB4-R1细胞生长有抑制效应。MTT实验结果显示PRF对NB4-R1细胞的生长抑制呈剂量和时间依赖性,10、30、50μg/ml PRF作用NB4-R1细胞时间越长,抑制作用越强。有趣的是,1μM ATO对NB4-R1细胞产生轻度的诱导分化作用,但这种作用随着时间延长而减弱,相同条件下,联合1μM ATO对NB-R1细胞抗增殖作用强于单药PRF,差异具有统计学意义(P<0.05)。2.一定浓度PRF处理NB4-R1细胞一定时段细胞形态学出现凋亡特征。0、10、30、50μg/mlPRF或联合1μM ATO处理NB4-R1细胞48h,瑞氏染色,光镜下观察到PRF±1μM ATO处理组呈现不同程度的细胞凋亡形态学特征,表现为细胞轮廓不清,胞浆内出现空泡,染色质凝聚、分块,核膜破裂,胞质皱缩,部分可见新月形凋亡小体,联合处理组较单药处理组明显,其中以PRF30、50μg/ml±1μM ATO组最为显著,大多细胞可观察到典型的细胞凋亡改变。3.FITC-Annexin V/PI双染流式细胞术检测细胞凋亡结果发现(0、10、30、50μg/ml)PRF处理NB-R1细胞48h后,细胞早期凋亡率分别为1.4%,1.8%,6.7%、8.3%；与1μM ATO联合处理48小时,细胞早期凋亡率分别为1.9%、4.4%、7.5%、10.9%；可见早期凋亡率呈浓度依赖,两组具有统计学差异(p<0.05)4.流式细胞术检测细胞周期变化发现0、10、30、50μg/ml PRF±1μMATO影响细胞进程,表现为S期细胞增多,分别为59.44%,57.36%,63.07%,45.94%,55.15%,39.12%,43.1%,63.48%,联合1μMATO组比各单药组Sub-G1百分比增加更为明显,尤其是50μg/ml PRF+1μM ATO组出现明显亚二倍体细胞,为26.7%。5.蛋白印迹法发现：PRF可上调NB4-R1细胞中JNK表达,下调ERK1/2及P38表达。[结论]较低浓度PRF(10、30、50μg/ml)体外对维甲酸耐药细胞株NB4-R1细胞具有增殖抑制作用,呈时间-浓度依赖性,与1μM ATO具有协同作用。其诱导凋亡作用机制可能通过阻滞NB4-R1细胞周期进程,激活JNK途径,下调ERK、P38MAPK通路。