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Kupffer细胞(Kupffer cells, KCs)的激活是肝移植缺血再灌注损伤（ischemia-reperfusion injury, IRI）的关键因素之一，核因子κB（nuclearfactor κB，NF-κB）经典途径可能是KCs激活的重要信号通路。如何抑制NF-κB经典途径对KCs的过度激活，又不影响KCs正常功能是尚待解决的问题。研究发现，NBD多肽通过干扰IKK复合物（IκB kinasecomplex）形成，能负性调控NF-κB经典途径，但不影响其基础功能。这为研究NBD多肽调控KCs活性提供了依据，其在肝移植IRI中的作用值得探索。第一部分NBD多肽抑制LPS刺激下NF-κB经典途径对KCs的激活目的：分离培养Sprague Dawley（SD）大鼠肝脏KCs，观察NBD多肽对内毒素（Lipopolysacharide, LPS）刺激下NF-κB经典途径有无抑制效应，以及对正常培养条件下NF-κB基础活性的影响，从细胞角度探讨NBD多肽对NF-κB经典途径的作用机制。方法：分离培养SD大鼠肝脏中KCs，在LPS刺激和正常培养两种条件下，预处理不同浓度(0μg/ml,25μg/ml,50μg/ml,100μg/ml)的野生型NBD多肽（WT NBD）2h后，ELISA检测培养上清中TNF-α和IL-6水平，初步判断NBD多肽能否抑制LPS诱导的炎症效应并保护NF-κB基础功能，摸索一有效的浓度；以该浓度为研究剂量，随机分为6组：①LPS组(加入LPS刺激24h)，②Mut NBD预处理组（突变型NBD多肽预处理2h后加入LPS培养24h），③WT NBD预处理组(WT NBD多肽预处理2h后加入LPS培养24h)，④WT NBD后处理组(LPS刺激2h后加入WT NBD培养22h)，⑤正常培养组，⑥正常+WT NBD组（加入WT NBD培养24h）。免疫荧光检测细胞中NF-κB/p65和IκBα表达；EMSA检测NF-κB转录活性；Western Blot检测P-IKK-2和IκBα表达；Real-time PCR检测TNF-αmRNA含量。结果：在LPS刺激下，预处理WT NBD能抑制KCs释放TNF-α和IL-6，且抑制效应随浓度增加而增强；而在正常培养条件下，各浓度的WT NBD对TNF-α和IL-6的基础水平无影响。以100μg/ml的浓度为研究剂量，进一步检测发现：NF-κB活性、NF-κB/p65核转录率、P-IKK-2表达、TNF-α mRNA水平在①②③④组中较高，⑤⑥组较低。其中②、④组分别与①组比较无统计学差异（P>0.05），③组较①组明显降低（P<0.05）；⑤⑥组间无明显差别（P>0.05）。相反，IκBα的表达在①②③④组中较低，⑤⑥组较高。其中②、④组分别与①组比较无统计学差异（P>0.05），③组较①组明显增高（P<0.05）；⑤⑥组间无明显差别（P>0.05）。结论：预处理WT NBD通过降低IKK复合物磷酸化，减轻IκBα降解，能抑制LPS诱导的NF-κB经典途径对KCs的激活，但对NF-κB的基础活性具有保护作用。第二部分NBD多肽负性调控NF-κB经典途径改善大鼠肝移植IRI目的：建立SD-SD大鼠原位肝移植模型，观察NBD多肽预处理供肝对术后肝脏IRI有无保护作用，以及对健康大鼠NF-κB基础功能的影响，探讨NBD多肽改善肝移植IRI的可能机制。方法：建立SD大鼠原位肝移植模型，观察术前2h经腹腔注射不同剂量（0mg/kg,2mg/kg,5mg/kg,8mg/kg）的WT NBD预处理供体对术后3h丙氨酸氨基转移酶(alanine aminotmnsferase，ALT)的影响，初步判断预处理NBD多肽对肝移植IRI有无保护作用，并摸索一有效的剂量。以该剂量为处理因素，随机分为4组：①NBD预处理+IRI组，②IRI组，③正常+NBD组(未行任何手术的健康大鼠经腹腔注射WTNBD)，④正常组(健康大鼠经腹腔注射同体积的生理盐水作为对照)。①、②组于术后3h、6h、24h处死动物，③、④组于腹腔注射24h后收集标本。全自动生化分析仪检测各组中ALT水平，HE染色观察组织病理学改变；TUNEL法检测细胞凋亡；ELISA检测血清中TNF-α含量；免疫组化检测组织中ICAM-1、iNOS表达；EMSA检测NF-κB转录活性；WesternBlot检测P-IKK-2和IκBα表达。结果：随剂量加大，预处理NBD多肽对肝移植术后3h的ALT水平降低越明显。以8mg/kg为研究剂量，进一步检测发现：ALT水平、NF-κB活性、P-IKK-2表达、TNF-α含量在①②组中增高明显，于术后6h达峰值，但各时间点①组水平较②组明显降低(P<0.05)；③④组水平较低，两组间无统计学差异(P>0.05)。相反，IκBα的表达在①②组中降低明显，于术后6h达最低值，但各时间点①组表达较②组明显增高(P<0.05)；③④组表达较高，两组间无统计学差异(P>0.05)。术后6h,①组病理损伤分级、凋亡细胞及ICAM-1、iNOS的表达明显低于②组。结论：首次证实以WT NBD预处理供体，通过负性调控肝脏中NF-κB经典途径，能有效改善移植术后IRI，但不影响体内NF-κB的基础活性。第三部分NBD多肽抑制移植肝脏中NF-κB经典途径对KCs的激活目的：分离术后不同时间点移植肝脏中的KCs，观察其IKK复合物-NF-κB信号通路的变化，证实预处理NBD多肽抑制了NF-κB经典途径对KCs的激活。方法：于肝移植术后3h、6h、24h，分离第二部分①、②两组供肝中的KCs。EMSA检测NF-κB转录活性，Western Blot检测P-IKK-2和IκBα表达，Real-time PCR检测TNF-α mRNA水平。结果：在各时间点，①组中NF-κB活性、P-IKK-2的表达、TNF-α mRNA水平较②组明显降低(P<0.05)，而IκBα的表达较②组明显增高(P<0.05)。结论：预处理NBD多肽抑制了缺血再灌注过程中NF-κB经典途径对KCs的激活，对KCs活性的调控是NBD多肽保护肝移植IRI的机制之一。