【摘 要】
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五指山猪是我国特有的珍稀猪种,在诸多开发应用研究中,发现五指山猪基因高度纯合,适于遗传工程操作;心、肝、肾功能代谢、血液生理生化指标和器官大小近似人类,是理想的动物
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五指山猪是我国特有的珍稀猪种,在诸多开发应用研究中,发现五指山猪基因高度纯合,适于遗传工程操作;心、肝、肾功能代谢、血液生理生化指标和器官大小近似人类,是理想的动物模型和人类异种器官移植供体。猪MHC(即猪主要组织相容复合物)又称猪白细胞抗原(SLA),MHC一般分为三大类,即三个主要类群:Ⅰ类基因、Ⅱ类基因、和Ⅲ类基因。经典的SLA-I类基因(相当于人类HLA-A、-B、-C基因)包括P1、P7、P14等,但仅有P1和P14基因表达蛋白产物,经典的SLA-Ⅱ类基因主要有DRA、DRB、DQA、DQB、DOB等但只有SLA-DR和SLA-DQ基因表达蛋白产物,Ⅲ类基因位于Ⅰ类基因和Ⅱ类基因之间,Ⅲ类基因目前有36个基因定位。本研究根据Gene Bank中已注册提交的五指山猪SLA-DQA基因cDNA序列设计引物,采用RT-PCR方法从五指山猪脾脏组织扩增到SLA-DQA基因cDNA序列,然后克隆到PGEM-T Easy载体中进行序列测定,该基因cDNA长为768bp,编码255个氨基酸,和一个终止密码子,预计蛋白分子量为28KD。将这个基因克隆到原核表达载体PET-28a(+)中经酶切、PCR扩增和测序分析确证其正确插入到表达载体中,阅读框是正确的,从而构建成重组表达载体PET-28a(+)-DQA。将重组质粒转化至宿主菌BL21(DE3)中,用IPTG进行诱导表达,对表达的蛋白用SDS-PAGE电泳分析,结果表明得到了与预计分子量相同的蛋白。
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