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海洋鱼类主要食物的海洋微藻被认为是海洋动物体内多不饱和脂肪酸(Polyunsaturated Fatty Acids,PUFAs)的来源。从微藻中提取的藻油富含二十二碳六烯酸(Docosahexaenoic Acid,DHA)和二十二碳五烯酸(Docosapentenoic Acid,DPA)。以DPA和DHA为代表的ω-3型PUFAs具有重要的生理意义,具有预防心脑血管疾病、调节血糖和脂类代谢、促进脑部、视觉神经发育和修复、提高免疫力、抗癌等生理活性。前期研究表明甘油酯型ω-3型PUFAs的人体吸收利用率远优于乙酯型和游离型,因此在富集的过程应保留其天然形式。本文对比研究了溶剂冷冻结晶法和高效液相色谱法(HPLC)对藻油中DHA及DPA甘油酯的富集效果。确定冷冻结晶最佳工艺条件和HPLC法色谱条件。对经冷冻结晶富集的藻油进行化学水解工艺的优化,并利用HPLC法分离游离DPA和DHA。主要包括以下几个部分:(1)实验藻油基本指标测定结果:酸值1.08 mgKOH/g,碘值236.75 g I2/100 g,过氧化值4.91 mmol/kg,不皂化物含量0.66%,皂化值174.22 mgKOH/g,水分及挥发物含量0.20%;主要为顺式结构,DHA含量为44.64%,DPA含量为11.65%,C16:0含量为31.75%,花生四烯酸(Arachidonic acid,ARA)和二十碳五烯酸(Eicosapentaenoic Acid,EPA)分别为0.70%和0.75%。(2)溶剂冷冻溶剂结晶法富集DPA和DHA甘油酯,对比单因素实验和正交实验结果分析,确定最佳工艺条件:以丙酮为溶剂,藻油/溶剂(v/v)比1:6,结晶时间8h,结晶温度-40℃,所得产物中DPA含量提升到14.36%,DHA含量提升到57.47%。富集藻油基本指标测定结果:酸值0.79 mgKOH/g,碘值279.84 g/100 g,过氧化值5.99mmol/kg,不皂化物含量0.97%、水分及挥发物含量0.18%;顺式结构构型等未有变化,处理后仍具有较高的品质。(3)HPLC法分离藻油中各甘油酯,以目标峰(主要成分DHA甘三酯,tri-DHA)为优化对象,最佳液相分离条件为检测波长205nm,流动相65%甲醇-35%异丙醇,流速1.0mL/min,柱温30℃。该条件下,目标峰保留时间为21.83min,与后一个相连峰的分离度度R为0.96。收集目标峰,GC/MS测定,共检测出10种脂肪酸,其中DHA含量56.27%,DPA含量3.81%,该法可较好地将DHA和DPA甘三酯分离,但收集物中DHA含量略低于溶剂冷冻结晶法。(4)对冷冻结晶最佳条件下获得的富集藻油进行皂化后酸化处理制取游离脂肪酸,获得最佳皂化条件:以NaOH为碱试剂,乙醇/水(v/v)比10:1,皂化时间60min,皂化温度50℃。该条件下,藻油水解率达到99.23%,DPA回收率达到71.17%,DHA回收率达到71.39%。以流动相比例为考察对象,用HPLC分离水解后藻油中的游离DPA和DHA,经过质谱分析,确定在65%乙腈-35%水的流动相下洗脱,可以较好的将两者分离。