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赭曲霉毒素A (Ochratoxins A)是由赭曲霉(Asperegillus ochraceus)、纯绿青霉(Penicillium verrucosum)和碳黑曲霉(A. carbonarius)所产生的有毒次生代谢产物。OTA的分子量为403.8,熔点169℃,为无色晶体,易溶于极性有机溶剂和碳酸氢钠溶液,微溶于水。在紫外光下OTA呈绿色荧光,最大吸收峰为333 nm。OTA广泛存在于各种食物中,可污染粮食谷物、蔬果、调味料、咖啡、啤酒、葡萄酒及干果等多种农作物和食品。另外,OTA在动物饲料中的污染也相当严重,并且在动物体内非常稳定,因此动物性食品中也常被OTA污染。OTA具有肾脏毒性、肝脏毒性、免疫毒性,以及致畸、致癌和致突变等作用,对动物和人体健康有很大的潜在危害。OTA被认为可能是巴尔干地方性肾病(Balkan Endemic Nephropathy, BEN)的主要致病因素之一。1993年,国际癌症研究中心(International Agency for Research on Cancer, IARC)将OTA定为2B类致癌物。联合国粮农组织／世界卫生组织食品添加剂联合专家委员会(Joint FAO/WHO Expert Committee on Food Additives, FAO/WHO JECFA)及欧盟等国家都对OTA进行了深入研究,制定出食品中OTA的最大允许限量值。食品添加剂和污染物法典委员会(Codex Committee on Food Additives and Contaminants, CCFAC)早在2000年就已提出了OTA的最高限量为5μg／kg。我国国家标准(GB／T 23502-2009)于2009年规定了食品中OTA含量的免疫亲和层析净化高效液相色谱测定方法。该标准适用于粮食和粮食制品、酒类、酱油、醋、酱及酱制品中OTA含量测定。其粮食和粮食制品的检出限为1.0μg／kg,酒类的检出限为0.1μg／kg,酱油、醋、酱及酱制品的检出限为0.5μg／kg。目前,世界上许多国家已制定出了限制食品中OTA含量的相关法规和标准。然而,准确、可靠、灵敏的分析方法则是相关法规标准实施的重要依据。现今,已经建立了多种检测OTA的方法,如薄层色谱法(Thin Layer Chromatography, TLC)、酶联免疫吸附法(Enzyme-Linked Immunosorbent Assay, ELISA)、毛细管电泳法(Capillary Electrophoresis, CE)、液相质谱法(Liquid Chromatography with Mass Spectrometry, LC/MS)和高效液相色谱法(High Performance Liquid Chromatography, HPLC)等。其中,高效液相色谱与荧光检测器联用技术因其灵敏度高,重现性好,操作简便,所以为检测OTA的常用方法。鉴于国内外对OTA污染情况的研究主要关注于粮食、酒类及饲料等制品,同时其限量标准的制定也是只针对这类产品。目前,只有少量研究报道了OTA对药用植物的污染情况。可以说,有关药用植物中OTA污染情况和限量标准的研究基本还处于空白阶段。但是,由于药用植物在其种植、采收、炮制和储存等过程中,均有被真菌污染、产生毒素的可能,从而影响到中药的质量及其安全性。因此,对真菌毒素在药用植物中的污染研究,将会受到越来越多的关注。而建立快速、有效的用于测定药用植物中真菌毒素含量的方法,对保障中药的质量及其安全性来说是十分必要的。本论文主要建立了中药中OTA含量的高效液相一荧光检测法。中药样品经甲醇／水体系(80：20,V／V)提取, OTA专用免疫亲和柱净化处理后,以0.5%乙酸水：乙腈(52：48,V／V)作为流动相,流速0.8 ml/min,柱温为30℃。激发波长为333 nm,发射波长为460 nm。分别以信噪比3：1和10：1测得赭曲霉毒素A对照品的检测限为0.30μg／kg,定量限为0.80μg／kg。标准曲线中OTA色谱峰面积和其浓度呈良好的线性关系,线性回归方程为：Y=4460.3X—-1221.4(Y：峰面积,X：浓度,r=0.9999)。分别选用甘草、神曲和生谷芽空白对照样品进行加样回收实验,考察此法在这三种中药所代表的不同类型基质中的加样回收率。在OTA添加范围1-50μg／kg时,其回收率为89.33%～99.12%,相对标准偏差为1.16%-6.65%。本实验所测定的57份中药材样品分别是来自6个不同的地区(北京、江西、新疆、河南、浙江、宁夏)。其中,在可见明显霉变的31份中药材中,有23份均能检测到OTA,且含量相差较大,其范围为1.2-158.7μg／kg；同时,在无明显霉变的26份中药材中有2份中药材中检测到少量OTA,其含量分别为2.5和5.7μg／kg。通过实验,发现霉变中药样品中OTA的检出率相当高,但其含量与发霉程度之间尚未发现明显联系。另一方面,无霉变的正常中药材样品中OTA的检出率较低,但有一份样品超出限量范围。该方法准确可靠,灵敏度高,成功地应用于中药样品中OTA含量的测定。因此,加大中药的检测范围,控制中药中OTA的限量,对于保障人们健康,安全使用中药,具有非常重要的意义。