本课题组前期药效学研究表明,对于类风湿性关节炎,雷公藤甲素经皮给药疗效确切,其与阿魏酸配伍使用后,疗效不减且毒性降低,但仍然具有一定的皮肤毒性,且配伍减毒所需阿魏酸的用量较大,不利于后期制剂研究,因此希望通过剂型改进的方式解决或降低皮肤毒性。本文通过将雷公藤甲素制备成外用缓释制剂,并从药物透皮吸收效应和动物皮肤刺激性等方面研究该剂型的释放和减毒效果,为雷公藤的临床应用及外用制剂的开发提供一定的理论依据。本课题主要进行了以下研究:1.雷公藤甲素二元醇质体的制备与评价采用注入-探头式超声法制备二元醇质体,并利用超滤离心法测定其包封率,以粒径和包封率为评价指标,进行单因素试验,选择单因素中影响较为显著的因素,采用Box-Behnken响应面法优化处方,最终确定雷公藤甲素二元醇质体处方工艺为:投药量8.3mg,卵磷脂浓度6.9mg/ml,醇相占比为38.5%,其中二元醇比例为7∶3,卵胆比5∶1,制备温度为35℃,转速600rpm,水合时间30min,超声功率为200W。对优化的二元醇质体进行表征,其外观澄清透明,有淡蓝色乳光,平均粒径为124.7±0.46nm,PDI为0.166±0.02,Zeta电位为-14.7±0.47m V,在4℃下稳定性较好;体外透皮给药研究发现,二元醇质体的释药速率和累计释放量要明显高于普通醇质体,且相较于乙醇-水溶液,二元醇质体的TP释放符合Higuchi模型,说明TP二元醇质体具有较好的皮肤穿透力,且具有缓释作用,能持续释放药物。2.雷公藤甲素二元醇质体凝胶的制备和体外透皮研究在沿用了二元醇质体的基础上,首先采用综合评分法确定了制备成醇质体凝胶所需的凝胶基质种类,再进行空白凝胶基质的制备方式与浓度的筛选,发现采用搅拌器1h与静置6h结合的方式能完全溶胀凝胶基质,且制备方式简单快捷,同时利用流变仪进行粘弹性测试,筛选出2%卡波姆作为制备前的空白基质浓度,以确保卡波姆940能够充分、均匀地溶胀,且体系不易过稀,实验过程中采用醇质体与溶胀的空白凝胶基质混合的方式制备的醇质体凝胶各方面性能较优,进一步的,通过粘弹性测试筛选出最适的二元醇质体与空白凝胶添加量的比例,随即得到最优的处方,并进行一系列的质量评价。制得的二元醇质体凝胶外观、p H、触变性等性能良好,稳定性较好,密封避光条件下能进行长期保存。体外透皮实验结果可知,乳膏、普通凝胶及二元醇质体凝胶中TP 24h单位面积累计透过量为340.09±30.29、542.21±3.84、602.45±4.91μg*cm-2,稳态透皮速率分别为98.91、161.23、175.68μg*cm-2*h,可见TP二元醇质体凝胶透过性能均优于一般半固体制剂,且具有良好的缓释特性,具备醇质体和凝胶剂的双重优势。3.基于在体微透析技术的雷公藤甲素醇质体凝胶经皮吸收行为研究采用微透析技术,结合LC-MS/MS测定方法,对TP二元醇质体凝胶的在体皮下药动学进行研究,首先建立了TP的LC-MS/MS含量测定方法,通过增量法、减量法研究了皮肤探针的在体回收率和传递率,从而得到探针较为准确的在体回收率,进而研究TP二元醇质体凝胶和普通凝胶的皮肤局部药动学。结果测得探针回收率在10h内趋于稳定,通过探针回收率对样品数据进行校正,得到普通凝胶和二元醇质体凝胶的TP皮下最大药物浓度(Cmax)分别为185.12、116.13 ng*ml-1,半衰期(T1/2)分别为3.35h、3.10h,达峰时间(Tmax)分别为2.25h、4.88h,10h内药时曲线下的面积(AUC0-10h)分别为657.59、610.27 ng*h*ml-1,可见较普通凝胶而言,TP二元醇质体凝胶在保证相近的释放量的同时,延缓了达峰时间,降低了局部药物浓度并能维持在一个相对稳定的水平。4.TP二元醇质体凝胶皮肤刺激性研究根据化学药物刺激性研究技术（编号【H】GPT4-1）和《中药药理研究方法学》中皮肤刺激性指导原则,将大鼠腹部皮肤脱毛进行给药,以红斑及水肿程度为指标,通过皮肤刺激反应评分,在相同给药量的情况下对TP二元醇质体凝胶和普通凝胶的皮肤刺激性进行考察。再结合皮肤截面病理组织切片和皮表扫描电镜的结果,初步说明对于TP普通凝胶,不论是单次还是多次给药,都将对大鼠皮肤产生损伤,随着给药次数的增加,损伤持续加重,该损伤存在性别差异,同等情况下雌性损伤大于雄性,通过抗氧化因子的测定,空白和TP二元醇质体凝胶CAT和GSH无明显差异,而TP普通凝胶组明显降低,且SOD及MDA明显上升,可见只有TP普通凝胶组皮肤产生了氧化应激,而TP二元醇质体凝胶相对安全,未产生明显皮肤刺激性,说明该剂型具有一定减毒效果。