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在同种异体移植排斥反应中，对同种异型抗原的间接识别机制越来越受到研究者的关注，通过对间接识别途径的调控来诱导器官移植受者对供者抗原的免疫耐受有可能成为克服移植排斥反应的有效方法之一。所谓间接识别就是指受者的T细胞识别自身抗原提呈细胞(antigen-presenting cells，APC)加工处理的来源于供者的主要组织相容性抗原(MHC抗原)。树突状细胞(dendritic cells，DC)是体内功能最强的专职APC，受者未成熟DC(immature dendritic cell,imDC)在摄取了来源于供者的．MHC抗原之后发育成熟，协同刺激分子表达增加，进而激活T细胞，引起移植排斥反应。因此如何使受者imDC在摄取供者MHC抗原的同时仍保持不成熟状态是通过调控间接识别途径诱导免疫耐受的关键。本课题在前期工作的基础上，观察了N-乙酰半胱氨酸(N-acetyl-L-cysteine，NAC)对负载了MHC抗原的DC发育、成熟和生物学功能的影响，以及NAC处理后的负载MHC抗原的DC延长同种异基因小鼠皮肤移植物存活时间的效果，以探索通过抑制受者imDC发育成熟、进而控制受者T细胞通过间接识别途径活化，最终诱导产生移植免疫耐受的新方法。主要研究内容和研究结果如下：
1．小鼠骨髓源DC的培养、形态观察和表型鉴定收集BALB/c小鼠骨髓细胞，经裂解红细胞和贴壁纯化后，加入含有GM-CSF、IL-4的RPMll640完全培养液培养，在光镜和扫描电镜下动态观察细胞形态变化，用流式细胞术进行细胞表型鉴定。结果：在细胞培养的不同时期观察到了典型的DC形态学特征。流式细胞仪检测显示，培养7天的细胞表面表达DC特异性标志CDllc的比率可达70﹪左右，CDllc<+>细胞表面协同刺激分子C：D86和MHC-Ⅱ类分子I-A的表达率较低，说明此种DC大多数是imDC。经脂多糖(lipopolysaccharide，LPS)刺激后CD86和I-A明显升高，即LPS可诱导其很快发育成熟。
2．NAC对负载MHC抗原的：DC分化成熟的影响取C57BL/6小鼠脾脏，经裂解红细胞后制备成脾细胞悬液，反复冻融3次(-80℃，37℃)后高速离心取上清(其中含有MHC抗原)，将其加入培养第6天的BALB/c小鼠骨髓源DC中继续培养24小时，使BALB/c小鼠DC负载C57BL/6小鼠MHC抗原。其中一组DC在负载抗原的同时加入NAC，分别用RT-PCR和MLR方法观察NAC对负载了供体MHC抗原的受体DC分化成熟和刺激同种异型T细胞增殖能力的影响。结果：与常规培养7天的imDC相比，负载MHC抗原后的DC其CD80、CD86、I-Aα、I-Aβ mRNA表达量明显增多，接近LPS刺激后的表达量，即为成熟DC；而负载MHC抗原后的DC经NAC处理后上述表面分子mRNA表达量与常规培养的imDC相近，即NAC可使DC在负载了供者MHC抗原之后仍稳定地处于不成熟状态。单向混合淋巴细胞反应(mixedlymphocyte reaction，MLR)显示负载MHC抗原的DC刺激T细胞增殖的能力明显增强；而负载抗原后用NAC处理的DC对T细胞的刺激能力则减弱。
3.负载供者MHC抗原的DC对同种异基因小鼠皮肤移植物存活期的影响以C57BL/6(H-2)小鼠作为皮肤移植的供鼠，以BALB/c(H-2)小鼠为受鼠进行皮肤移植。术前1周给受鼠尾静脉注射负载供鼠MHC抗原并经NAC处理的受鼠imDC，或给予雷帕霉素(Rapamycin，RAPA)(3mg/kg/d)灌胃，或两种方法联合应用。术后观察移植皮片存活时间。实验结果显示：未做任何处理的对照组移植皮片平均存活时间为11.20天；RAPA组为13.83天；(MHC-NAC)-DC组为17.50天；而联合组为20.80天。以上结果说明：移植术前应用负载供鼠MHC抗原并经NAC处理的受鼠imDC可延长移植皮片的存活时间，且联合应用RAPA与imDC比单独应用其中一种方法更为有效，提示RAPA与负载MHC抗原的imDC在诱导小鼠皮肤移植耐受中具有协同作用。