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目的:通过研究重组蛋白B7-H4对小鼠中性粒细胞表面粘附分子CD11b和CD18、趋化因子受体CXCR2、胞内活性氧和胞外弹性蛋白酶的影响,同时观察重组蛋白B7-H4对中性粒细胞迁移能力的影响,从中性粒细胞粘附、迁移、胞内活性氧以及胞外弹性蛋白酶释放等方面评估B7-H4对中性粒细胞功能的调节。方法:选取7周SPF级BALB/C雄性小鼠,分离骨髓源性中性粒细胞,将分离的中性粒细胞分为6组:CON组(对照组)、LPS组(脂多糖活化组)、B7-H4(1μg)组(1μg B7-H4重组蛋白干预组)、LPS+B7-H4(1μg)组(脂多糖加1μg B7-H4重组蛋白干预组)、B7-H4(5μg)组(5μg B7-H4重组蛋白干预组)和LPS+B7-H4(5μg)组(脂多糖加5μg B7-H4重组蛋白干预组)。每组分别给予不同的处理因素。CON组为正常对照组;LPS组加入100ng LPS,使LPS浓度为100 ng/ml;B7-H4(1μg)组加入1μg B7-H4,使B7-H4浓度为1μg/ml;LPS+B7-H4(1μg)组加入100ng LPS和1μg B7-H4,使LPS浓度为100 ng/ml,B7-H4浓度为1μg/ml;B7-H4(5μg)组加入5μg B7-H4,使B7-H4浓度为5μg/ml;LPS+B7-H4(5μg)组加入100ng LPS和5μg B7-H4,使LPS浓度为100 ng/ml,B7-H4浓度为5μg/ml。对处理因素不同的各组中性粒细胞进行培养,在培养后的6小时(6H)、12小时(12H)以及24小时(24H)三个时间点采用流式细胞仪检测各组中性粒细胞表面CD11b、CD18以及CXCR2的表达,通过Transwell趋化实验检测各组中性粒细胞的迁移趋化能力,同时采用流式细胞仪检测中性粒细胞胞内活性氧水平,酶联免疫吸附实验(ELISA)检测各组细胞培养液内中性粒细胞弹性蛋白酶水平。结果:(1)6H、12H、24H三个时间点各个时间点内的LPS组、LPS+B7-H4(1μg)组及LPS+B7-H4(5μg)组CD11b的表达分别与CON组比较,均显著升高(P<0.05),但三组两两比较差异无统计学意义(P>0.05)。6H、12H、24H三个时间点各个时间点内B7-H4(1μg)组和B7-H4(5μg)组CD11b的表达分别与CON组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。B7-H4(1μg)组和B7-H4(5μg)组CD11b的表达在24H明显高于6H,LPS+B7-H4(5μg)组CD11b的表达在24H明显低于6H(均P<0.05)。(2)6H时间点内LPS组和LPS+B7-H4(1μg)组CD18的表达分别与CON组比较,均显著增高,B7-H4(1μg)组、LPS+B7-H4(1μg)组、B7-H4(5μg)组和LPS+B7-H4(5μg)组CD18的表达分别与LPS组比较,均明显降低(均P<0.05);12H时间点内LPS组、LPS+B7-H4(1μg)组和LPS+B7-H4(5μg)组CD18的表达分别与CON组比较,均显著升高,B7-H4(1μg)组、B7-H4(5μg)组和LPS+B7-H4(5μg)组CD18的表达分别与LPS组比较,均明显降低(均P<0.05);24H时间点内LPS组、LPS+B7-H4(1μg)组和LPS+B7-H4(5μg)组CD18的表达分别与CON组比较,均显著增高(均P<0.05)。(3)6H、12H时间点内LPS组、LPS+B7-H4(1μg)组和LPS+B7-H4(5μg)组CXCR2的表达分别与CON组比较,均明显下降,LPS+B7-H4(1μg)组和LPS+B7-H4(5μg)组CXCR2的表达分别与LPS组比较,均明显下降(均P<0.05)。24H时间点内LPS组、LPS+B7-H4(1μg)组和LPS+B7-H4(5μg)组CXCR2的表达分别与CON组比较,均明显下降,LPS+B7-H4(5μg)组CXCR2的表达较LPS组明显下降(均P<0.05)。(4)在三个时间点,除了6H时间点内的B7-H4(1μg)组,其余各组迁移趋化的中性粒细胞数分别与CON组比较,均明显减少(均P<0.05);6H时间点内LPS+B7-H4(1μg)组和LPS+B7-H4(5μg)组迁移趋化中性粒细胞数分别与LPS组比较,均明显减少(均P<0.05);12H时间点内LPS+B7-H4(5μg)组迁移趋化中性粒细胞数较LPS组明显减少(P<0.05)。(5)6H、12H、24H三个时间点内各组中性粒细胞胞内活性氧水平分别与CON组比较,均显著升高(均P<0.05);12H时间点内LPS+B7-H4(5μg)组活性氧水平较LPS组显著升高(P<0.05);24H时间点内LPS+B7-H4(1μg)组和LPS+B7-H4(5μg)组活性氧水平分别与LPS组比较,均显著升高(均P<0.05)。(6)6H、12H、24H三个时间点各个时间点内的LPS组、LPS+B7-H4(1μg)组及LPS+B7-H4(5μg)组分别与CON组比较,弹性蛋白酶水平均显著升高(均P<0.05);6H、12H、24H三个时间点各个时间点内的LPS+B7-H4(5μg)组弹性蛋白酶水平均高于LPS组(均P<0.05)。结论:B7-H4能通过抑制活化的中性粒细胞表面粘附分子CD18的表达,抑制中性粒细胞粘附及迁移。B7-H4可以协同LPS抑制中性粒细胞表面趋化因子受体CXCR2的表达,影响中性粒细胞的迁移。B7-H4能抑制CXCL2刺激中性粒细胞迁移趋化,B7-H4与LPS可以协同抑制CXCL2对中性粒细胞迁移趋化作用。B7-H4能刺激中性粒细胞胞内活性氧水平升高,同时可协同LPS增加中性粒细胞释放活性氧,B7-H4重组蛋白剂量越大,协同作用越早出现。大剂量B7-H4能协同LPS促进中性粒细胞分泌弹性蛋白酶。