平堂二号方对高脂喂养小鼠能量代谢及胃肠功能的影响

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目的:平堂二号方是厦门大学附属第一医院院内制剂,具有清热燥湿通便的功效,目前临床上主要用于湿热内蕴证的治疗,在此基础上,本研究采用高脂饮食诱导代谢紊乱综合症,模拟小鼠脾胃湿热小鼠模型,旨在探讨PTF对代谢紊乱小鼠脂质代谢、能量代谢、胃肠功能、肠道炎症及内分泌细胞的影响及其机制。  方法:4-6周龄SPF级C57BL/6小鼠15只,适应性喂养一周后随机分为正常饮食组(Ctrl)、高脂饮食组(HFD)及平堂二号方治疗组(Pingtangerhaofang,PTF),每组5只;正常饮食给予常规维持饲料,高脂组及PTF组给予60%高脂饲料,2周后进行药物干预;正常组及高脂组小鼠每日给予生理盐水,治疗组小鼠给予PTF灌胃,每周监测血糖、体重变化;10-11周时分别进行葡萄糖耐量(IPGTT)及胰岛素敏感试验(IPITT);连续灌胃15周后置于代谢笼中,监测48小时摄食量、O2消耗量、CO2释放量及呼吸商RQ,后置于常规环境适应2天;用含有碳粉的半固体糊状灌胃,15min后测定碳末胃残留量及小肠推进长度;收取血浆及相关胃肠组织;检测血浆TG、TC、NEFA血脂水平;HE染色观察胃肠粘膜结构变化;Western-blot检测胃肠增殖凋亡相关因子PPCNA、BAX、Bcl-2表达量;免疫组织化学方法检测胃肠道脑肠肽Ghrelin、PYY及GLP-1的表达;RT-PCR检测肠道TNF-α、IL-6、IL-4、IL-1β等炎症因子。  结果:高脂饮食成功诱导了小鼠肥胖模型,小鼠的体重、血糖、血脂、胆固醇水平显著高于对照组小鼠,PTF治疗后显著缓解了HFD诱导的代谢紊乱,包括降低血糖、体重及血脂水平,改善了葡萄糖耐量。在能量代谢方面,高脂饮食组能量消耗、碳水化合物氧化及能量摄入均表现出明显下降趋势,脂肪酸氧化则明显上升,PTF治疗后在一定程度上逆转了这一趋势;胃肠动力方面,高脂饮食导致胃残留率明显升高,对小肠推进率无明显影响,PTF治疗后胃残留率明显下降,小肠推进率较正常组及高脂组明显升高;脑肠肽方面,高脂组饥饿素ghrelin下降,酪酪肽PYY上升,PTF治疗后ghrelin增多,PYY下降,三组间GLP-1无明显差异;胃肠道结构方面,HE染色显示正常组胃及十二指肠粘膜结构清晰,未见上皮细胞增生,模型组肠上皮细胞增生明显,粘膜肿胀,隐窝加深,结构紊乱,极性消失,以胃黏膜损伤为主,PTF治疗后有逆转损伤趋势;胃肠组织凋亡方面,高脂组引起组织凋亡因子BAX/BCL-2比值升高,以胃及十二指肠为主,PTF治疗后可改善损伤;肠道炎症方面,高脂饮食结肠组织中MCP-1及IL-4表达量显著上升,而IL-1β、TNF-α及IL-6均有升高趋势,治疗后,MCP-1显著降低,IL-4、IL-1β及TNF-α有下降趋势,IL-6无差异。  结论:1.高脂饮食是一个非常成熟的肥胖模型,长期高脂饮食,可作为重要的湿热动物模型诱导因素进行研究。  2.高脂饮食诱导的脾胃湿热,可引起模型小鼠明显的代谢紊乱综合症,且伴有不同程度的能量代谢障碍和胃肠损伤  3.经验方PTF可在一定程度上改善机体代谢紊乱、能量消耗以及三大营养物质供能等,并在促进食欲及胃肠动力,改善胃肠道损伤方面具有一定的治疗作用,推测可能是该药物清热燥湿功效有效的改善了机体的脾胃湿热状态。
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