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目的:动脉粥样硬化是一种慢性炎症性病变。肺炎衣原体（Chlamydia pneumoniae,C.pneumoniae）感染作为一种新的危险因素与动脉粥样硬化发生发展关系密切,但其导致动脉粥样硬化的发病机制并不完全清楚。血管平滑肌细胞（vascular smooth muscle cells,VSMCs）从血管中膜向内膜迁移是动脉粥样硬化发病的关键环节之一。本课题组前期研究发现,C.pneumoniae感染可促进VSMC的迁移,但具体分子机制尚未解明。近年研究显示,病原体感染可上调白细胞介素（interleukin,IL）-17C的表达,且与细胞迁移有关。本研究拟建立C.pneumoniae感染ApoE-/-小鼠动脉粥样硬化模型和体外C.pneumoniae感染大鼠原代VSMC模型,旨在探讨IL-17C在C.pneumoniae感染促进VSMC迁移中的作用及其分子机制。方法和结果:第一部分:C.pneumoniae感染通过诱导IL-17C的表达促进VSMC迁移首先利用C.pneumoniae感染ApoE-/-小鼠动脉粥样硬化模型以及体外C.pneumoniae感染VSMC模型,探讨C.pneumoniae感染对IL-17C表达的影响。分别采用免疫荧光、实时定量聚合酶链反应（real-time polymerase chain reaction,RT-PCR）以及Western blot实验检测C.pneumoniae感染的ApoE-/-小鼠动脉粥样硬化病变内VSMC以及大鼠VSMC中IL-17C的表达。随后,分别利用重组IL-17C（recombinant IL-17C,rIL-17C）蛋白与VSMC共培养和RNA干扰技术改变VSMC中IL-17C的表达水平,采用Transwell实验观察C.pneumoniae感染对VSMC迁移能力的影响,以明确IL-17C在C.pneumoniae感染促进VSMC迁移中的作用。研究结果显示,C.pneumoniae感染能够上调ApoE-/-小鼠动脉粥样硬化病变内VSMC以及大鼠VSMC中IL-17C的表达。rIL-17C刺激可促进VSMC迁移,而沉默IL-17C的表达可抑制C.pneumoniae感染诱导的VSMC迁移。以上结果表明,C.pneumoniae感染可通过诱导IL-17C的表达促进VSMC迁移。第二部分:C.pneumoniae感染VSMC通过激活c-Fos/ERK通路促进IL-17C的表达利用C.pneumoniae感染ApoE-/-小鼠动脉粥样硬化模型以及体外C.pneumoniae感染大鼠原代VSMC模型,确认C.pneumoniae感染对c-Fos表达及活化的影响。分别利用免疫荧光和Western blot实验检测C.pneumoniae感染ApoE-/-小鼠动脉粥样硬化病变内VSMC和大鼠VSMC中c-Fos表达及活化水平。为进一步证实c-Fos在C.pneumoniae感染VSMC促进IL-17C表达中的作用,应用细胞核转染技术使VSMC中c-Fos过表达,同时利用c-Fos siRNA以及细胞核转染技术转染c-Fos Ser32和Thr325位点的突变质粒分别抑制c-Fos的表达及其Ser32和Thr325位点的磷酸化,采用Western blot实验检测VSMC中IL-17C的表达。随后,利用（Chromatin immunoprecipitation,CHIP）实验检测C.pneumoniae感染VSMC后c-Fos与IL-17C启动子区域的结合情况,Western blot实验检测C.pneumoniae感染和过表达c-Fos后ERK的磷酸化水平;给予ERK磷酸化抑制剂PD98059预处理后,Western blot实验检测过表达c-Fos后VSMC中IL-17C的表达。实验结果显示,C.pneumoniae感染可促进ApoE-/-小鼠动脉粥样硬化病变内VSMC以及大鼠VSMC中c-Fos表达及活化。过表达c-Fos可上调VSMC中IL-17C的表达,分别抑制c-Fos的表达及Ser32和Thr325位点的磷酸化后,C.pneumoniae感染促进IL-17C表达的作用被显著抑制,表明C.pneumoniae感染VSMC通过诱导c-Fos的表达及活化促进IL-17C的表达。但C.pneumoniae感染未能增强c-Fos与IL-17C启动子区域的结合;C.pneumoniae感染和过表达c-Fos均可促进VSMC中ERK的磷酸化;而给予PD98059预处理后,过表达c-Fos所诱导的IL-17C高表达则被显著抑制。以上结果表明,C.pneumoniae感染VSMC通过激活c-Fos/ERK通路促进IL-17C的表达。第三部分:C.pneumoniae感染VSMC通过IL-17C激活ERK而促进c-Fos的表达及活化分别利用rIL-17C蛋白与VSMC共培养,采用Western blot实验检测VSMC总蛋白和核蛋白中c-Fos蛋白的表达及其Ser32和Thr325位点的磷酸化水平,以明确IL-17C对c-Fos表达及活化的影响;随后,采用Western blot实验检测VSMC中ERK的磷酸化水平,并在给予PD98059预处理后,采用Western blot实验检测rIL-17C刺激后VSMC总蛋白和核蛋白中c-Fos蛋白的表达及其Ser32和Thr325位点的磷酸化水平。最后,利用IL-17C siRNA沉默IL-17C的表达,Western blot实验检测C.pneumoniae感染VSMC后c-Fos的表达及其Ser32和Thr325位点的磷酸化水平,以观察C.pneumoniae感染VSMC后,IL-17C对c-Fos的表达及活化的影响。实验结果显示,rIL-17C可促进VSMC中c-Fos表达及其Ser32和Thr325位点的磷酸化;且rIL-17C可促进ERK活化,而抑制ERK的活性后,rIL-17C促进c-Fos表达及c-Fos Ser32和Thr325位点磷酸化的作用被明显抑制,表明IL-17C可通过激活ERK促进c-Fos的表达及活化。而沉默IL-17C的表达后,C.pneumoniae感染促进c-Fos表达及活化的作用被显著抑制。以上结果表明,C.pneumoniae感染VSMC后通过IL-17C激活ERK而促进c-Fos表达及活化。结论:C.pneumoniae感染可能通过c-Fos/IL-17C通路促进VSMC迁移。