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艾滋病(Acquired immunodeficiency syndrome,AIDS),又称获得性免疫缺陷综合征,是由人类免疫缺陷病毒(Human immunodeficiency virus,HIV)感染引起,主要攻击人CD4阳性的免疫细胞,导致人体免疫功能进行性损害、易出现各种机会感染及肿瘤的严重感染性疾病。目前治疗HIV感染最有效的方法是联合应用多种抗逆转录病毒药物,即高效抗逆转录病毒疗法(Highly active antiretroviral therapy,HAART),即便如此,仍有相当比例的患者没有得到有效的免疫重建。己有的研究发现线粒体DNA(Mitochondrial DNA,mtDNA)的多态性对HIV感染者的疾病进程以及抗逆转录病毒药物的疗效及副作用等可能产生不同的影响,同时,作为对HAART的有益补充,中医药通过“扶助正气,调节阴阳”促进了HIV/AIDS患者的免疫重建,在艾滋病的防治上取得了卓有成效的工作。我们试图通过对HIV/AIDS患者mtDNA高变Ⅰ区碱基的变异情况及贞芪扶正颗粒联合HAART对HIV感染的治疗效果进行分析,以期能够从分子生物学的角度对HIV/AIDS患者的治疗提供更个体化的治疗策略,并探讨“扶正”类中药在HIV感染中的治疗作用。第一部分 HIV/AIDS患者线粒体DNA多态性的研究目的:对HIV/AIDS患者及正常健康人群的外周血白细胞mtDNA高变Ⅰ区的碱基序列进行对比分析,探讨HIV/AIDS患者mtDNA高变Ⅰ区单核苷酸多态性的变化。方法:1.选取达到入选条件的110例HIV/AIDS患者为病例组,另外110例健康人群作为对照组,提取全血基因组并对包含mtDNA高变Ⅰ区在内的序列进行PCR扩增。2.PCR产物经琼脂糖凝胶电泳鉴定、离心吸附柱纯化后进行正反双向测序,将序列信息与修正后的标准剑桥序列对比,采用spss13.0软件进行χ2检验分析其碱基的变异情况。结果:1.在所测的mtDNA高变Ⅰ区中,病例组碱基平均变异率为1.03%;对照组碱基平均变异率为0.64%,病例组碱基平均变异率明显高于对照组,有统计学意义(P<0.01)。2.病例组在 16129、16182、16183、16189、16223、16362 位点出现了超过20%的变异率。与对照组比较有增高的趋势,但无统计学差别。结论:1.HIV/AIDS患者mtDNA高变Ⅰ区存在碱基平均变异率的增高。2.HIV/AIDS 患者 mtDNA 高变 Ⅰ 区 16129、16182、16183、16189、16223、16362位点变异频率有增高的趋势,但其意义还需要更进一步的研究。第二部分贞芪扶正颗粒对HIV/AIDS患者免疫重建影响的研究及患者线粒体DNA多态性的回顾性分析目的:在HAART治疗的HIV/AIDS患者中加用贞芪扶正颗粒3、6月后,观察其CD4+T细胞计数、免疫重建效率及血常规、生化指标与单独进行HAART治疗的对照组之间的差异,并回顾性分析免疫重建效率不同的患者mtDNA高变Ⅰ区碱基的变异情况。方法:1.在第一部分的病例组中选取达到入选条件的63例贞芪扶正颗粒联合HAART治疗的HIV/AIDS患者为中药+HAART组;HAART治疗的另外75例HIV/AIDS患者为对照组。2.在疗前及疗后3、6月检测两组血CD4+T细胞计数及血常规、生化指标,采用spss13.0软件进行重复测量的方差分析、t检验及χ2检验分析CD4+T细胞计数、免疫重建效率及血常规、生化指标在两组之间的差异。3.根据第一部分研究的碱基变异情况对贞芪扶正颗粒+HAART治疗后免疫重建效率不同的患者mtDNA高变Ⅰ区碱基变异进行χ2检验分析。结果:1.未分层的两组患者疗后6月血CD4+T细胞计数:中药+HAART组,437.36±154.24;对照组,351.04±123.98,P=0.019;疗后 6 月免疫重建有效率:中药+HAART组71.2%,对照组有效率52.9%,P=0.033。2.0≤CD4+T细胞计数<200/μl分层,两组患者疗后6月CD4+T细胞计数:中药+HAART组,437.3±154.24;对照组:303.74±150.67,P=0.013;疗后 6 月免疫重建有效率,中药组有效率77.8%,对照组有效率44.4%,P=0.027。3.200/μl≤CD4+T细胞计数<400/μl分层,两组患者疗后6月后CD4+T细胞计数:中药+HAART 组,543.37±210.24;对照组,467.53±130.41,P=0.023;疗后 6月免疫重建有效率,中药组有效率63.6%,对照组有效率51.4%,P=0.30。4.两组患者疗后6月血白细胞(WBC)及血红蛋白(HB)指标:对照组 WBC:疗前,5.15±2.03;疗后,4.13± 1.95*;P=0.034 Hb:疗前,144.80±14.84;疗后,123.84±14.12*;P=0.017中药+HAART组WBC:疗前,4.55±1.06;疗后,5.03±1.42;P=0.190 Hb:疗前,136.30±25.46;疗后,140.74±34.33;P=0.4105.贞芪扶正颗粒+HAART组中免疫重建不良的HIV/AIDS患者mtDNA高变Ⅰ区16129、16189两个位点变异率有增高的趋势。结论:1.治疗6月后,中药组CD4+T细胞计数及免疫重建有效率比对照组增加。2.对CD4+T细胞计数<200/μl的HIV/AIDS患者,贞芪扶正颗粒+HAART对于患者的免疫重建可能更有优势。3.贞芪扶正颗粒对进行HAART治疗的HIV/AIDS患者白细胞(WBC)和血红蛋白(Hb)可能有保护及升高作用。4.HIV/AIDS患者mtDNA高变Ⅰ区的位点如16129、16189等可能与患者的免疫重建效率有关。