【摘 要】
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森林脑炎又称蜱传脑炎,已被列为中国五大职业性传染病之一,是由携带森林脑炎病毒（Tick-borne encephalitis virus,TBEV）的蜱虫叮咬后所致。在我国的发病率呈上升趋势,据研究统计,森林脑炎在我国东北的发病率高达80%,致死率约为10-20%。森林脑炎治疗没有特效药物,因此需要我们进一步研究该病毒的特点,从而加快TBEV相关疫苗和抗病毒药物的开发。本论文重点构建5种TBEV重
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森林脑炎又称蜱传脑炎,已被列为中国五大职业性传染病之一,是由携带森林脑炎病毒（Tick-borne encephalitis virus,TBEV）的蜱虫叮咬后所致。在我国的发病率呈上升趋势,据研究统计,森林脑炎在我国东北的发病率高达80%,致死率约为10-20%。森林脑炎治疗没有特效药物,因此需要我们进一步研究该病毒的特点,从而加快TBEV相关疫苗和抗病毒药物的开发。本论文重点构建5种TBEV重组质粒,基于HIV-1慢病毒包装体系制备TBEV假病毒,为TBEV假病毒的成功制备提供基础,用于中和抗体检测,有望成为疫苗生产过程中效价测定的高效率替代工具。通过基因工程手段,本论文成功构建5种在包膜蛋白的选择上以及信号肽的有无上存在差异的重组质粒,第一类为不带有信号肽的重组质粒,分别表达Pre M+E、Pre M+E+NS1融合蛋白,第二类重组质粒在第一类的基础上加有信号肽,主要验证信号肽以及NS1蛋白对假病毒制备的影响,第三类为带有信号肽单独表达E蛋白的重组质粒,验证单个E蛋白能否制备假病毒。5种重组质粒经测序鉴定,扩增序列与Gen Bank中收录的TBEV（JQ650523.1）目的基因序列一致,重组质粒构建正确。将5种重组质粒分别与含有EGFP报告基因的HIV-1慢病毒包装体系共同转染293T细胞制备TBEV假病毒。共转后的细胞沉淀及上清经ELISA检测,信号肽可增强E蛋白的表达。经荧光观察、Western Blot检测与细胞感染性实验对TBEV假病毒进行鉴定,结果表明带有信号肽表达Pre M+E融合蛋白的重组质粒TBEV-信+Pre M+E与HIV-1慢病毒包装体系共转可制备出同野毒株一样能够感染靶细胞的TBEV假病毒。通过Reed-Muench法计算假病毒的滴度为3.96×10~4TCID50/m L。本研究制备的TBEV假病毒生物安全性高,可成为森林脑炎灭活疫苗免疫原性评价的替代工具。TBEV假病毒对研究TBEV的复制、感染机制、致病机理以及研发TBEV抗病毒药物、改进森林脑炎治疗方法、降低发病率和致死率提供理论依据。
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