目的：过氧化物酶体增殖物激活剂受体γ（peroxisome proliferators-actived receptors gamma, PPARγ）是一类由配体激活的核转录因子，PPARγ与其特异性药物性或生理性配体结合活化后，能发挥调控多种靶基因表达的生物学作用。其中抗糖尿病的噻唑烷二酮类药物（thiazolidinediones, TZDs）是PPARγ高选择性的药物性配体。目前的研究显示，给予TZDs活化PPARγ途径不仅具有降血脂、降血糖、改善胰岛素抵抗、降血压等代谢调节作用，还具有抗炎症和抗脏器纤维化等非代谢性调节作用。在肾脏疾病中，TZDs对于糖尿病肾病和非糖尿病的5／6肾大切动物模型中均证实其有不依赖于降血压、降血糖或降血脂的肾脏保护作用，能显著抑制各种损伤导致的肾小球硬化。但是，TZDs和PPARγ途径对于肾脏间质炎症和纤维化的作用至今未见报道。本课题采用大鼠单侧输尿管梗阻模型和TNFα刺激的体外培养的内髓集合管上皮细胞模型，从在体和相应的离体实验两方面共同观察TZDs（罗格列酮和吡格列酮）和PPARγ途径对肾脏间质炎症和纤维化的作用，并探讨其可能的作用机制。该研究能为临床开辟新的针对肾小管间质炎症和纤维化疾病的药物治疗提供理论依据。 方法： 1．在体实验（大鼠单侧输尿管梗阻（UUO）模型）：建立左侧输尿管梗阻模型，并将雄性SD大鼠随机动物随机分成五大组，每大组按不同时间点分为若干亚组，每组6只：（1）假手术对照组（Sham组）：假手术后14天大鼠；（2）假手术服大剂量罗格列酮(30mg·kg^-1·d^-1)组（Sham+RSG组）：细分为假手术后3天服大剂量罗格列酮组（Sham+RSG-3d）、假手术后7天服大剂量罗格列酮组（Sham+RSG-Td）、假手术后14天服大剂量罗格列酮组（Sham+RSG-14d）。（3）UUO不用药组：细分为UUO后3天组（UUO 3d）、UUO后7天组（UUO 7d）、UUO后14天组（UUO 14d）；（4）UUO服用小剂量罗格列酮(5mg·kg^-1·d^-1)治疗组（UUO+RSG1组）：细分为UUO3天服小剂量罗格列酮组（UUO+RSG1—3d）、UUO7天服小剂量罗格列酮组（UUO+RSG1—7d）、UUO14天服小剂量罗格列酮组（UUO+RSG1—14d）；（5）UUO服用大剂量罗格列酮(30mg·kg^-1·d^-1)治疗组（UUO+RSG2组）：细分为UUO3天服大剂量罗格列酮组（UUO+RSG2—3d）、UUO7天服大剂量罗格列酮组（UUO+RSG2复旦大学华山医院博士学位论文中文摘要一7d）、UU014天服大剂量罗格列酮组（UUO+RSGZ一14d）。药物以0.75%灭菌的甲基纤维素配制，于UUO术前48小时开始以灌胃方式给药，不用药组给予等体积0.75%甲基纤维素灌胃。在不同的干预时间点处死动物，从以下几个方面观察实验指标:（1） RSG对UUO模型作用的指标:包括动物模型一般情况和生化指标;以S、Mas son病理学染色来评估肾小管间质病变损伤计分和纤维化指数;免疫组化等方法比较肾脏组织巨噬细胞浸润状况的ED--1阳性细胞计数等。（2）逸朋上述韭坦扒士l鱼指拯:①扰黄症难月次粼时着奋{包括用RT一PCR半定量方法检测梗阻的左侧肾皮质单核细胞化学趋化蛋白1（monoCyte Chemoattraetantprotein一1，MCP一1）、肿瘤坏死因子a（Tumor neerosis faetora，TNFa）、单核细胞集落刺激因子（maerophage一eolony stimulating faetor，M一CsF）;ELxSA试剂盒测定左侧肾皮质MCP一1含量等:②扰纤瀚化殡月郝制时着方二包括免疫组化染色观察肾组织内代表肾小管上皮细胞转型的指标。一SMA（alpha Smoothaetin，。一SMA）和致纤维化因子转化生长因子一p:（transforming growthfactor betal，TGF一p:）的表达;RT一PCR半定量方法检测梗阻的左侧肾皮质纤维化相关因子TGF一p:、结缔组织生长因子（eonneetive tissue growthfaetor，CTGF）、骨形态发生蛋白7（bone morphogenie protein type7，BMP一7）及Smad蛋白6（Smad6）等的mRNA表达;ELISA试剂盒测定左侧肾皮质TGF一p:含量;western blotting方法检测致纤维化性I型纤溶酶原激活物抑制因子（plasminogen aetivator inhibitor一1，PAI一）和保护性的BMP一7的蛋白表达;③对募么应藏方面瀚难月{用化学比色法测定肾皮质匀浆中脂质过氧化产物丙二醛（malondialdehyde，MDA）的含量，以及抗氧化酶过氧化氢酶（eatalase，CAT）和超氧化物歧化酶（superoxide dismutase，SOD）的水平:④关于无劣作月功受徽逮径时着标二包括用RT一PCR和Western blotting方法检测 RSG作用的受体P以RY的表达量，并用PPAR丫转录因子分析试剂盒检测即AR丫转录活性。 2.离体实验（体外培养的小鼠内髓集合管细胞（inner medullaryeolleeting duet，IMCD）模型）:IMCD细胞是UUO损伤中受累最早和最严重的细胞，TNFa在UUO炎症和纤维化病变中具有始动性作用。为了进一步验证说明在体实验的结果，用培养小鼠IMCD细胞株，利用TNFQ刺激制备与UUO相应的炎症性肾小管模型，分两步进行实验:（l）观察P以R丫本身在工McD炎症刺激中的作用实验分组:IMCD空白对照组，工MCD+T NFa刺激组;转染PPAR丫野生型质粒的pPPARY一IMCD对照组和pPPARY一IMCD+TNFa刺激组。（2）观察PPAR丫激动剂毗格列酮和PPAR丫特异性拮抗剂GW9662对I就D炎症刺激的作用实验分组:IMCD空白对照组，IMCD+TNFa刺激组，Pio+TNFa