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多环芳烃(Polycyclic aromatic hydrocarbon,PAHs)是一种无处不在的环境污染物,可侵入皮肤、呼吸系统、消化系统危害人体。PAHs具有遗传毒性和胚胎毒性,可破坏免疫系统干扰胎儿的发育。苊烯(Acenaphthylene,ACE)是美国环保局规定水体中优先控制16种PAHs之一,具有致癌性。由于PAHs严重威胁着人类的健康,因此,建立PAHs快速检测方法的意义尤为重大。目前,免疫学检测技术具有常规理化分析技术不可比拟的高灵敏性、选择性和特异性,是一种易操作、低成本、高效的PAHs检测技术。本实验以ACE作为目标物,采用活化酯法将3-丁酸苊烯与BSA偶联制备ACE的免疫抗原,与OVA偶联制备检测抗原。皮下免疫新西兰大耳白家兔获得抗ACE的多克隆抗体(Polyclonal antibody,Pc Ab),然后基于纯化后的Pc Ab,建立水体中ACE的快速检测方法。建立并优化间接竞争ELISA(ic-ELISA),检测时间为5 h 10 min,线性回归方程:y=20.897x-65.861,相关系数R2=0.9974。灵敏度为4.26 ng/m L。线性检测范围12.8 ng/m L-9.5μg/m L,添加不同浓度的ACE标准品作为模拟样品,检测回收率在99.42%~100.73%之间。建立并优化基于纳米磁珠ic-ELISA(MBs-ic-ELISA),检测时间为38 min,y=23.642x-69.819,相关系数R2=0.9915。灵敏度为2.37 ng/m L。线性检测范围为3.9 ng/m L–3.5μg/m L。添加不同浓度的ACE标准品作为模拟样品,检测回收率在98.73%~103.4%之间。建立并优化基于MBs生物素链霉亲和素放大ic-ELISA(MBs-BS-ic-ELISA),检测时间为22 min,线性回归方程:y=16.509x-26.761,相关系数R2=0.9998。灵敏度为0.16 ng/m L。线性检测范围为0.68 ng/m L-2.93μg/m L,添加不同浓度的ACE标准品作为模拟样品,测得模拟样品(纯净水、自来水、湖水)的ACE平均回收率分别是101.1%、102.1%、103.8%。采集五种不同水样作为实际检测样品,分别是长春水、北京水、长白山水、三门峡水和本实验室自来水。其中,ic-ELISA检测出三门峡水中ACE浓度为14.89 ng/m L,其他水样未检出。MBs-ic-ELISA检测出北京水中ACE浓度为3.74ng/m L,三门峡水ACE浓度为13.92 ng/m L,其他水样未检出。MBs-BS-ic-ELISA检测出长春水ACE浓度为1.07 ng/m L,北京水ACE浓度为3.85 ng/m L,三门峡水ACE浓度为14.96 ng/m L,其他水样未检出。综上所述,本研究制备了抗ACE多克隆抗体,并建立三种AC快速灵敏检测方法:ic-ELISA、MBs-ic-ELISA、MBs-BS-ic-ELISA。这三种检测方法的检测时间与灵敏度依次有不同程度的改进,可满足不同需求的检测。