UPLC法同时测定大鼠血清中GBN和GBO的方法研究

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传统蒙药荜茇是我们课题组一直研究的主要内容之一。荜茇宁的主要成分是酰胺类碱,包括胡椒碱和荜茇宁。其中胡椒碱(代号GBO)具有多种生物活性,比如抗氧化活性、抗血小板及保肝作用等;荜茇宁(代号GBN)是我们课题组从荜茇药材中首次发现的具有显著降血脂活性并毒性小的生物碱。本文首先对蒙药荜茇做了体外成分分析,确定荜茇的提取物中能够检测到GBN和GBO,并得到了荜茇体外HPLC-UV指纹图谱。在此基础上,进行了体内检测。体内检测时对荜茇的给药样品、血清样品的预处理方法及液相色谱检测条件进行了筛选。给药样品是荜茇药材的三种样品(荜茇的75%乙醇提取物、纯水提取物及荜茇颗粒药材)灌胃给大鼠;血清预处理方法是以乙腈沉淀法、甲醇沉淀法、乙酸乙酯萃取法及固相萃取法对空白和含药血清进行处理;超高液相检测条件是ACQUITY UPLC(?) HSS T3色谱柱(2.1 mmx 100mm,1.8μm, Waters Corporation, USA),流动相为乙腈:甲酸水(0.01%)=50:50,流速为0.2mL/min,柱温为30℃,样品池温度为10℃,紫外吸收波长为338nm。结果表明,在以上UPLC条件下,荜茇的75%乙醇提取物为给药样品,固相萃取方法为血清样品预处理方法时分析条件为最佳,并建立了用SPE-UPLC法在Wistar大鼠血清中同时测定GBO和GBN含量的方法。GBO在血清样品中线性范围为1~100μg/ml,回归方程为y=61916.46x+13473.46(r2=0.9990),方法回收率为101.69%~ 108.71%(n=5); GBN在血清样品中线性范围为0.6~12.8μg/ml,回归方程为y=61457x+5725.385 (r2=0.9989),方法回收率为100.61%~111.53%(n=5)。GBN和GBO的最低检测限均为0.15~0.2μg/ml,定量限均为0.6~O.7μg/ml;日内、日间RSD均小于10%(n=5)。该方法适用于同时测定大鼠血清中GBN和GBO的含量。
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