论文部分内容阅读
目的:在蛋白水平上研究黑素瘤A375和Skmel-l细胞系中cFLIP与NF-κ Bp65的表达。选择cFLIP表达较低的A375细胞系，转染pCMV-Tag2B-cFLIPp43表达载体，筛选稳定表达cFLIPp43的A375细胞系。探讨转染pCMV-Tag2B-cFLIPp43表达载体的黑素瘤A375细胞系中NF-κ B的活化情况。
方法:应用Wes t er n Bl ot 方法检测黑素瘤A375和SK-Mel-1细胞系中cFLIP与NF-κ Bp65的表达。构建pCMV-Tag2B-cFLIPp43表达载体，并对cFLIP表达较低的A375细胞系进行稳定转染，western blot 筛选鉴定稳定表达cFLIPp43的A375细胞系。
对稳定表达cFLIPp43的A375细胞系进行western blot检测NF-κ Bp65的表达。免疫荧光技术检测稳定转染pCMV-Tag2B-cFLIPp43的A375细胞系中NF-κ Bp65的核转位情况。并用荧光素酶双报告基因技术检测瞬时转染不同剂量的pCMV-Tag2B-cFLIPp43表达载体的A375细胞系中NF-κ B的活化情况。
结果:黑素瘤A375细胞系中cFLIP与NF-κ Bp65的表达较SK-Mel-1细胞系中cFLIP与NF-κ Bp65的表达低。成功筛选了稳定表达cFLIPp43的A375细胞系。稳定表达cFLIPp43的A375细胞系中NF-κ Bp65的蛋白表达水平较A375细胞系高。免疫荧光检测稳定表达cFLIPp43的A375细胞系中NF-κ Bp65的核转位明显增加，荧光素酶双报告基因技术检测随着转染pCMV-Tag2B-cFLIPp43表达载体剂量的增加，NF-κ B的活化倍数增加。
结论:黑素瘤A375细胞系中cFLIP与NF-κ Bp65的表达较SK-Mel-1细胞系中低。A375细胞系转染pCMV-Tag2B-cFLIPp43表达载体后可以增加NF-κ Bp65的表达及促进NF-κ B信号通路的活化。