山苍子精油对鱼类致病性水霉属真菌的抑制研究

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山苍子精油(Litsea cubeba extraction oil,LEO),是一种具有出色抗氧化和抗菌性能的植物提取物。水霉属真菌带来的疾病是养殖业大患,因此对其的抑制和杀灭研究一直是水霉研究的重点。同丝水霉(Saprolegnia monoica Pringsh)是水霉属的一个重要种,在我国的东北、华北、东南沿海以及内陆省份均有发现。同丝水霉对温度的适应范围很广,几乎终年可见。本文围绕应用山苍子精油抑制同丝水霉的相关问题开展了如下研究:成功培养同丝水霉有性生殖菌丝,并获得大量卵孢子。将美国临床实验室标准化协会(CLSI)的M38方案改进后引入淡水养殖鱼类真菌疾病的药物筛选,并使用该方法确定了12种药物对同丝水霉的最低抑菌浓度(MIC80):孔雀石绿>二硫氰基甲烷>水杨醛>噻本咪唑>柠檬醛>山苍子精油>LGA>邻苯二甲醛>戊二醛>LM>苦参碱>异噻唑啉酮,且pH对结果的影响大于温度。将同丝水霉菌丝和卵孢子用山苍子精油处理后,通过普通光镜和电子显微镜观察。分析认为:山苍子精油可以有效破坏同丝水霉菌丝的细胞壁和细胞膜的结构,使其出现质壁分离现象,并且对胞内各细胞器具有全方位的破坏能力;对孢子细胞壁的损坏程度较小,破坏萌发所需的营养成分,使孢子失去萌发能力。通过不同药物分别对罗非鱼和鳗鲡96h急性毒性实验,得出药物对参试鱼类的半致死浓度和安全浓度。结果显示药物对罗非鱼的毒性强弱排序为:二硫氰基甲烷>水杨醛>LM>柠檬醛>山苍子精油>LGA;而对鳗鲡:二硫氰基甲烷>水杨醛>柠檬醛>LGA>山苍子精油。亚急性毒性实验选择总抗氧化能力(T-AOC)、还原型谷胱甘肽(GSH)、谷胱甘肽-S转移酶(GST)等的含量作为测定实验动物对药物应激反应的指标。结果显示:在低浓度下,山苍子精油对参试鱼类T-AOC指标的影响幅度较小,即对鱼类的整体抗氧化机能不会造成损伤或损伤较小。通过对GST、总谷胱甘肽和GSH的检测发现:在鱼体对山苍子精油的解毒过程中,罗非鱼的鳃受到一定程度的损伤,其鳃组织中GSH的氧化还原代谢途径相对肝脏组织占主导地位;鳗鲡鳃组织中GSH的结合代谢途径相对罗非鱼占更大比重;鳗鲡的鳃和肝脏组织机能均未受到较大影响。总之,无论从药性还是安全性上,山苍子精油都是一种很有开发潜力的抗水霉药物。
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