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广州管圆线虫是一种危害严重的人兽共患寄生虫。人因食入含广州管圆线虫Ⅲ期幼虫的淡水螺、陆地螺、蛞蝓或转续宿主淡水鱼、虾、蛙、蟹而感染,并引起嗜酸粒细胞增多性脑膜脑炎。近年来,随着人民生活水平的提高和饮食习惯的改变,广州管圆线虫病已发展成为一种不容忽视的食源性寄生虫病。目前,全球已报道病例3000多例。广州管圆线虫的病原学诊断十分困难,到目前为止,国内外尚无一种理想的方法来诊断广州管圆线虫病。因此,本论文调查了深圳市广州管圆线虫疫源地的分布状况;对广州管圆线虫生活史进行了研究;应用单克隆抗体技术建立了双抗体夹心ELISA和胶体金免疫层析法两种检测广州管圆线虫循环抗原的方法,并将其初步应用于人体广州管圆线虫病的诊断及疗效考核。
调查结果显示,广州管圆线虫幼虫在螺类的检出率为15.6%(96/616),其中福寿螺的平均感染率为20.7%(65/314),显著高于褐云玛瑙螺的感染率10.3%(31/302)。广州管圆线虫成虫在鼠类心肺中的检出率为12.0%(37/308),其中,褐家鼠的感染率16.6%(31/187)显著高于黄胸鼠(4.9%,6/121);雌鼠(褐家鼠25.6%,黄胸鼠7.8%)的感染率显著高于雄鼠(褐家鼠8.9%,黄胸鼠2.9%),可能因为雌鼠哺育需要食用更多螺类来补充蛋白。据报道,地方性动物病广州管圆线虫在野生鼠和螺内都存在感染,表明在深圳存在广州管圆线虫自然疫源地。
通过对广州管圆线虫实验室生活史循环的研究发现,福寿螺的人工感染率(20/20,100%)和感染度(162条/螺),都显著高于褐云玛瑙螺的人工感染率(11/20,55.0%)和感染度(48条/螺);感染鼠类肺组织染色切片中含大面积的虫卵或幼虫结节,周围有较多炎性细胞,为进一步研究广州管圆线虫的致病机理提供可靠依据。
以纯化的广州管圆线虫成虫分泌物为抗原免疫BALB/c小鼠,取免疫脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞在50%的PEG1500作用下进行细胞融合。用间接ELISA和有限稀释法筛选杂交瘤细胞株,结果筛选出4株可稳定分泌抗广州管圆线虫分泌物蛋白的单克隆抗体的杂交瘤细胞株。其中,两株(12D5,21B7)能识别分子量约为98kD的广州管圆线虫成虫抗原的单克隆抗体,用于建立双抗体夹心ELISA法检测广州管圆线虫循环抗原。并检测了实验感染广州管圆线虫大鼠血清80份和广州管圆线虫病人血清58份,检出率均为100%,与日本血吸虫、华支睾吸虫、卫氏并殖吸虫、人蛔虫、细粒棘球绦虫、猪囊尾蚴、弓形体、旋毛虫等病人血清无交叉反应。表明此法具有敏感性高、特异性强、重复性好等优点。
本研究还通过胶体金免疫层析技术,制备出了检测广州管圆线虫病的金标试剂盒,该试剂盒除了敏感性高、特异性强、重复性好外,更比双抗体夹心ELISA法操作简便、快速,通常只需5~15min。另外,双抗体夹心ELISA法和胶体金免疫层析法已初步应用于广州管圆线虫病的疗效考核。
本研究获得了深圳市广州管圆线虫自然疫源地的第一手资料,掌握了广州管圆线虫实验室内生活史循环的条件,成功研制出了能用于检测广州管圆线虫循环抗原的双抗体夹心ELISA法和胶体金免疫层析法,为广州管圆线虫病的临床诊断、疗效考核、流行病学调查等提供了很好的检测手段,并为广州管圆线虫的进一步研究奠定了基础。