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相较于游离酶,固定化酶的稳定性和耐受性都略胜一筹。目前来说,固定化酶的方法很多,但大多数制备方法均存在缺点,难以实现连续,稳定的催化作用。本文采用交联法与吸附法结合来固定化酶。
本文的主要目的是制备多种高效的阳离子型聚合物,与辣根过氧化物酶(HRP)接枝后固定在玻璃载体上,得到活性较高的固定化酶,所做的主要工作和得到的结论如下所示:
(1)基于羧甲基纤维素(CMC),选用甲基丙烯酰氧乙基三甲基氯化铵(DMC)为功能单体,过硫酸钾(KPS)为引发剂引发二者接枝共聚,经戊二醛(GA)改性后,得到阳离子型聚羧甲基纤维素CMC-g-(PDMC-r-GA);经GA上醛基和辣根过氧化物酶(HRP )反应,HRP和聚合物CMC-g-(PDMC-r-GA)进行接枝共聚,得到CMC-g-(PDMC-r-GA)/HRP;通过吸附-交联法将生物酶接枝聚合物分别固定在盖玻片和玻璃微管上。并用紫外可见分光光度计(UV/vis)对固定化酶性能进行了分析研究。结果显示,CMC-g-(PDMC-r-GA)的成功制备,与HRP接枝固定后,生物酶保持良好的稳定性和活性,在414nm处的吸光度达到0.15左右。
(2)基于羧甲基纤维素(CMC)和甲基丙烯酸缩水甘油酯(GMA),过硫酸钾引发二者接枝共聚,经乙二胺(EDA )和戊二醛改性后,得到阳离子型聚合物CMC-g-(PGMA/NH2-r-GA);再经与酶交联后,得到CMC-g-(PGMA/NH2-r-GA)/HRP;通过吸附交联法将酶固定在玻璃载体上,并用紫外分光光度计(UV/vis)对酶的活性和稳定性进行测量。结果表明,固定后的生物酶活性较高,在414nm处的吸光度高达0.8左右。
(3)二者与HRP接枝后固定,固定后的酶均表现出较好的稳定性和活性,这证明了生物酶与聚合物接枝的可行性。
(4)相比聚合物CMC-g-(PDMC-r-GA),阳离子聚合物CMC-g-(PGMA/NH2-r-GA)接枝酶固定后,载体为盖玻片时,酶在催化过程中,A414nm提高了4倍多,最高达到0.7左右;载体为玻璃微管时,固定化酶A414nm提高了4.5倍,最高达到0.8左右;主要是因为CMC-g-(PDMC-r-GA)/HRP与玻璃载体反应时,仅发生了阴阳离子吸附反应,而CMC-g-(PDMC-r-GA)/HRP与玻璃载体作用时,同时发生吸附和共价结合,因此固定的酶更牢固,固定的酶含量更多。
本文的主要目的是制备多种高效的阳离子型聚合物,与辣根过氧化物酶(HRP)接枝后固定在玻璃载体上,得到活性较高的固定化酶,所做的主要工作和得到的结论如下所示:
(1)基于羧甲基纤维素(CMC),选用甲基丙烯酰氧乙基三甲基氯化铵(DMC)为功能单体,过硫酸钾(KPS)为引发剂引发二者接枝共聚,经戊二醛(GA)改性后,得到阳离子型聚羧甲基纤维素CMC-g-(PDMC-r-GA);经GA上醛基和辣根过氧化物酶(HRP )反应,HRP和聚合物CMC-g-(PDMC-r-GA)进行接枝共聚,得到CMC-g-(PDMC-r-GA)/HRP;通过吸附-交联法将生物酶接枝聚合物分别固定在盖玻片和玻璃微管上。并用紫外可见分光光度计(UV/vis)对固定化酶性能进行了分析研究。结果显示,CMC-g-(PDMC-r-GA)的成功制备,与HRP接枝固定后,生物酶保持良好的稳定性和活性,在414nm处的吸光度达到0.15左右。
(2)基于羧甲基纤维素(CMC)和甲基丙烯酸缩水甘油酯(GMA),过硫酸钾引发二者接枝共聚,经乙二胺(EDA )和戊二醛改性后,得到阳离子型聚合物CMC-g-(PGMA/NH2-r-GA);再经与酶交联后,得到CMC-g-(PGMA/NH2-r-GA)/HRP;通过吸附交联法将酶固定在玻璃载体上,并用紫外分光光度计(UV/vis)对酶的活性和稳定性进行测量。结果表明,固定后的生物酶活性较高,在414nm处的吸光度高达0.8左右。
(3)二者与HRP接枝后固定,固定后的酶均表现出较好的稳定性和活性,这证明了生物酶与聚合物接枝的可行性。
(4)相比聚合物CMC-g-(PDMC-r-GA),阳离子聚合物CMC-g-(PGMA/NH2-r-GA)接枝酶固定后,载体为盖玻片时,酶在催化过程中,A414nm提高了4倍多,最高达到0.7左右;载体为玻璃微管时,固定化酶A414nm提高了4.5倍,最高达到0.8左右;主要是因为CMC-g-(PDMC-r-GA)/HRP与玻璃载体反应时,仅发生了阴阳离子吸附反应,而CMC-g-(PDMC-r-GA)/HRP与玻璃载体作用时,同时发生吸附和共价结合,因此固定的酶更牢固,固定的酶含量更多。