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自1983年首例转基因作物(geneticallymodifiedcrops,GMCs)问世以来,其生物安全性(biosafety)问题便受到了广泛争论。同时,随着生物技术的发展,越来越多的GMOs(geneticallymodifiedorganisms)成为商品进入市场。由于其生物安全性,对GMOs的检测和对GMOs特性的叙述又引起了更多的关注。
PCR检测方法在检测转基因食品材料上被证明具有特异性和灵敏性,例如对roundupreadysoybean,RR大豆的检测。本研究将PCR技术用于转基因大豆及其加工产品的检测,建立了定性PCR检测转基因大豆及其加工产品的方法,利用市场上购买的样品,进行了实际检测工作。
为了确保能从大豆原材料和加工食品(初加工和深加工食品)中提取到高质量的模板DNA,降低PCR反应中的抑制物(例如加工食品中的可可粉成分),本实验用改良的CTAB、SDS和试剂盒三种提取方法,并比较了它们之间的差异,试验结果发现:油脂类豆制品和发酵豆制品采用改良的SDS法提取基因组DNA较好,蛋白类豆制品采用改良的CTAB法提取基因组DNA较好,非发酵豆制品三种方法都可以,并以大豆特异性内源基因-大豆凝集素基因(lectin)为参照,对获得的DNA的可扩增性加以验证。
本研究建立了转基因大豆及其加工产品常用的调控基因CaMV35S启动子、NOS终止子和目的基因CP4-EPSPS及其相互交叉基因序列的PCR检测技术,对PCR结果进一步用酶切和测序进行验证。针对41种样品材料进行检测。研究结果表明:本试验中PCR法的豆粕转基因检测检出下限为:重量稀释法分析转基因最低检测限为0.5%(w/w)。该实验方法操作简易,效率高,适用于对大豆及其加工产品的检测。
根据目前外源基因旁侧序列对转基因植物的安全性是否有影响还不确定,利用反向PCR(invertedPCR,IPCR)方法,测定并分析了转基因豆粕(roundupreadysoybean)中外源基因的旁侧序列,该研究为今后对GMOs的生物安全性的进一步研究奠定了基础。