【摘 要】
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磷是植物生长发育必需的大量营养元素之一,然而土壤中的有效磷浓度远不能满足生产中植物生长发育需要。在植物高效利用土壤磷素过程中高亲和力磷转运蛋白起到至关重要的作用。
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磷是植物生长发育必需的大量营养元素之一,然而土壤中的有效磷浓度远不能满足生产中植物生长发育需要。在植物高效利用土壤磷素过程中高亲和力磷转运蛋白起到至关重要的作用。本试验以水稻磷转运蛋白Pht1家族成员基因之一OsPT1为研究对象,以粳稻品种Dongjin为试验材料,通过PCR检测、酵母和蛙卵两种异源表达体系以及 T-DNA插入和超表达转基因技术,研究了OsPT1的表达和功能,所获得的主要结果如下:
通过对OsPT1的基因序列、氨基酸序列、跨膜结构等方面分析得出OsPT1在水稻基因组中位于3号染色体上,以单拷贝形式存在,没有内含子,具有Pht1家族基因的典型特征;基因的启动子里面含有三个W-box,两个PHO-like element基序。
Real-Time PCR和半定量PCR检测结果显示,OsPT1在水稻根部和地上部持续表达,但是受缺磷诱导表达增强。T-DNA插入突变体材料中OsPT1表达模式发生了变化,不再受外源磷素变化影响,而且地上部的表达高于根部。
利用酵母以及蛙卵两大异源表达系统对OsPT1所编码蛋白的功能研究结果表明,OsPT1所编码蛋白能够与缺失磷转运蛋白PH084的酵母突变体实现互补,蛙卵试验也表明OsPT1所编码蛋白具有吸收外源磷酸盐的功能;进一步分析表明OsPT1所编码蛋白对磷酸盐吸收的Km值在酵母中为177μM,而在蛙卵中为27μM,可能是一个高亲和力磷转运蛋白。
不同pH环境对酵母生长影响实验以及荧光染料指示蛙卵细胞内pH变化实验显示,OsPT1所编码蛋白吸收磷同时伴随细胞内pH的下降,表明OsPT1所编码蛋白是一个与质子相偶联的磷转运蛋白。
OsPT1超表达能增强超表达植株对磷的吸收,并且使得超表达植株生物量增加,OsPT1可能既参与水稻对磷的吸收也参与磷在体内的转运过程。
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