【摘 要】
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目的和意义:将乙型肝炎病毒DNA整合到细胞基因组中,建立在体外稳定表达HBV的细胞模型。为进一步研究相关基因对HBV复制的调节作用奠定基础。方法:pGEM -HBV1.3质粒经HindIII
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目的和意义:将乙型肝炎病毒DNA整合到细胞基因组中,建立在体外稳定表达HBV的细胞模型。为进一步研究相关基因对HBV复制的调节作用奠定基础。方法:pGEM -HBV1.3质粒经HindIII限制性内切酶消化,将HBV1.3全长DNA切下,与同样经HindIII限制性内切酶降解过的PU21连接,得到PU21-HBV重组质粒。将该重组质粒采用电击转染方法导入HepG2细胞中,G418筛选阳性克隆并以X-gal染色、PCR、RT-PCR、Southern blot、ELISA等方法验证HBV DNA的插入和表达。结果:PU21-HBV重组质粒经测序证明HBV1.3全长DNA正确与PU21载体连接,该重组质粒转染HepG2细胞后经G418筛选,得到一系列阳性克隆, Southern blot证实HepG2细胞基因组中含HBV DNA,RT-PCR结果表明HBV DNA在HepG2细胞中有功能基因的转录。结论:HBV1.3已被整合在HepG2细胞染色体中并能稳定表达其RNA。稳定的HBV感染细胞模型构建成功。
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