肿瘤一直是威胁人类健康和生命的严重疾病之一，因而全世界医学界都在破解肿瘤发生的原因及寻找替代传统的手术、放、化疗的新方法、新机制。近年来研究认为，肿瘤是癌基因激活、抑癌基因缺失或失活造成的。人体内存在抑制肿瘤系统。在这个系统中有多个调节因子参与。当这些抑制因子发生缺失或失活时则导致细胞生长、增殖、分裂失调，进而会导致细胞癌变。 人核糖核酸酶抑制因子(Human ribonuclease inhibitor，hRI)是体内重要的蛋白质。功能是多方面的。其基因定位15p<15.5>,分子量约为50kD，在哺乳动物细胞质内广泛存在。hRI一级结构富含亮氨酸和大量还原型半胱氨酸，空间结构由富含亮氨酸残基重复区(Leucin-richreapeat，LRR)的a/β螺旋折叠结构重复多次形成的弯曲的马蹄形结构。国内外研究发现，在正常细胞内，hRI通过作为RNase A抑制剂(Ki=4.0×10<-14>M)，从而调控细胞内RNA的水平；hRI还可以作为血管生长因子(Angiogenin，Ang)抑制剂(Ki=7.1×10<16>M)而抑制肿瘤血管形成、浸润及转移等作用；hRI还具有抗机体氧化损伤功能。综合国内外的研究，本课题组认为hRI具有抗肿瘤作用，推测其可能为肿瘤抑制基因的候选者之一。 为了亚明hRI是否是肿瘤抑制因子，我们构建了针对hri基因的siRNA 表达载体 pKD-dsRI，及该 siRNA 的稳定表达载体pLNCX-pKD-dsRI。同时构建了过表达hri的携带有绿色荧光蛋白的表达载体(pEGFP．C<,1>-hri)及逆转录病毒表达载体(pLNCX-EGFP-C<,1>-hri)。将这些重组质粒分别转染到小鼠黑色素瘤细胞B16细胞中，用细胞荧光定位法检测共转染的报告基因．绿色荧光蛋白(hri基因的逆转录病毒载体pLNCX-EGFP-C<,1>-hri)的荧光表达程度。结果表明，检测到干扰效果可达80﹪以上。用RT-PCR半定量分析显示，干扰效果可达80﹪以上。 westen-blotting分析表明， RI表达明显下调。我们用载体pLNCX-pKD-dsRI对B16细胞中的hri基因表达干扰后，用MTT检测细胞生长增殖能力，结果发现细胞生长能力显著增加，增殖率是对照 B16细胞的120﹪-145﹪(P<0.05)；流式细胞仪检测细胞周期时相，结果是细胞周期发生明显改变，S期增加，G2/M期减少。说明pLNCX-pKD-dsRI转染组的B16细胞增殖加快。初步证明人核糖核酸酶抑制因子属于一种肿瘤抑制因子。我们的研究首次通过RNA干涉技术，将靶向人核糖核酸酶抑制因子基因的84bp的shRNA序列导入到小鼠黑色素瘤细胞B16中。结果表明干扰hri基因后，细胞周期改变和细胞增殖加快。该研究为人核糖核酸酶抑制因子应用于肿瘤的基因治疗奠定了理论基础。