大鼠视网膜再灌注损伤致细胞凋亡的内质网应激机制研究

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目的:探讨视网膜缺血再灌注(RIR)损伤致细胞凋亡的内质网应激(ERS)机制。 方法:①建立大鼠RIR模型SD大鼠随机均分为对照组和RIR组,采用前房高压灌注(110 mmHg×60min)的方法建立大鼠RIR模型,应用HE染色观察视网膜组织形态学改变,采用TUNEL法检测视网膜细胞凋亡的情况。 ②RIR损伤对视网膜ERS标志分子BiP和XBP-1表达的影响SD大鼠随机分成对照组和RIR组(各含再灌注后3 h、6 h、12 h、24 h和72 h共5个亚组,每亚组6只)。应用半定量RT-PCR方法检测BiP mRNA的表达水平。应用免疫组织化学方法检测BiP和XBP-1的蛋白表达。 ③BiP反义寡核苷酸对再灌注损伤中细胞凋亡的影响玻璃体腔内注射FAM标记的BiP反义寡核苷酸,用荧光显微镜观察其转染情况;SD大鼠随机均分为RIR组、BiP反义组和BiP错义组,于再灌注后12 h、24 h和7 d处死(每亚组6只),用免疫组织化学方法检测视网膜BiP蛋白的组织表达,用TUNEL检测视网膜细胞凋亡,HE染色观察RIR 7 d后大鼠视网膜组织的损伤情况。 ④RIR和BiP反义寡核苷酸对促凋亡分子CHOP和促存活分子GADD34转录的影响120只SD大鼠随机分成对照组、RIR组、BiP错义组和BiP反义组,分别包括再灌注后3 h、6 h、12 h、24 h和72h共5个亚组,每亚组6只。用半定量RT-PCR方法检测CHOP和GADD34的转录表达。 结果:①大鼠RIR模型及视网膜细胞凋亡情况Ⅰ.可以清楚观
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