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本文研究目的:制备德国小蠊变应原浸液,并对其主要致敏蛋白组分Bla g 2进行鉴定,同时确定变应原浸液中Bla g 2的含量。
研究方法:用碳酸氢盐一盐水提取液(pH8.2)制备德国小蠊变应原浸液,通过SDS-PAGE对其蛋白组分进行分离,利用Western blotting方法鉴定浸液中的主要致敏蛋白组分——Bla g 2;在Ecoli中表达Bla g 2-GST融合蛋白,并用其纯化产物作为抗原免疫新西兰白兔,制备兔抗Bla g 2血清;分别采用ELISA和Western blotting方法检测兔抗血清的效价和特异性,并通过Western blotting方法检测兔抗血清和变应原浸液中Bla g 2的反应性,采用ELISA方法建立Bla g 2的标准曲线,利用标准曲线测定变应原浸液中Bla g 2的含量。
研究结果:用碳酸氢盐一盐水提取液(pH8.2)按照1:25的浸提比例、72h的浸提时间可以制备出较理想的德国小蠊变应原浸液;SDS-PAGE显示德国小蠊变应原浸提产物中含有分子量大小约为36kDa的蛋白条带,Western blotting结果表明浸液可以分别与蜚蠊过敏患者的血清和Bla g 2的抗血清反应,在36kDa左右处有杂交条带,证明该蛋白即为Bla g 2;ELISA测定浸提产物中Bla g 2的浓度约为1.16μg/ml。
研究结论:本研究成功地制备了德国小蠊变应原浸液,并对浸液中的主要致敏蛋白组分Bla g 2进行了定性和定量检测。将此结果与浸液生物活性的测定相结合,将会为德国小蠊变应原制剂的标准化提供帮助,从而提高德国小蠊过敏症诊断的准确性和治疗的安全性。