猪瘟是由猪瘟病毒引起的急性、热性、高致病性和高死亡率疾病,是养猪业防控的重大疾病之一;疫苗免疫是防控猪瘟的最有效手段。目前,国内外猪瘟活疫苗生产大多采用冷冻干燥技术,通过添加冷冻干燥耐热保护剂可使猪瘟疫苗在2～8℃条件下有效保存2年;但现有的耐热保护剂配方中含有的明胶和蛋白质比例高,它们常常导致强烈的过敏、发热等免疫副反应,影响疫苗安全性和有效性。另外,冷冻干燥疫苗仍然对环境温度的要求比较严格,在保存、运输及使用中均需要依赖较高配置的"冷链"系统,给疫苗的存储、运输和使用带来极大的不便。泡沫干燥技术制备的疫苗耐热性能往往更加优良,能够减低对"冷链"系统的依赖性。本研究以改进猪瘟疫苗真空冷冻干燥技术和创新研发猪瘟疫苗泡沫干燥剂型为目的,通配方的筛选、干燥工艺的优化和耐老化实验,研究适用于猪瘟活疫苗真空冷冻干燥生产的无蛋白、无明胶冻干保护剂新配方及相应的干燥工艺,以期解决由蛋白和明胶引起的疫苗安全性问题;探索猪瘟活疫苗泡沫干燥保护剂配方并建立相应的泡沫干燥工艺,为室温保存猪瘟活疫苗研究奠定基础。1猪瘟活疫苗真空冷冻干燥剂型的研究冷冻干燥保护剂以蔗糖、乳糖、EDTA等为配方主要成分,通过单因素变量试验,以配方形态、干燥疫苗形态、残余水份含量为指标,筛选冷冻干燥猪瘟活疫苗耐热保护剂配方,并成功筛选出了无明胶、无蛋白配方D4和传统冻干保护剂配方S3-T1,D4为首个猪瘟冷冻干燥耐热保护剂的无明胶、无蛋白配方,可有效避免使用过程中因明胶、外源蛋白引起的附带免疫反应。在筛选出配方的基础上,对冷冻干燥工艺进行优化。针对冻干产品分层、萎缩等现象,通过对升华阶段搁板温度的控制和一次干燥时间的调整,以冻干产品的物理形态、残余水份和37℃ 10 d耐老化为标准,最终以优化工艺对较理想的配方D4和S3-T1进行3批次的重复,测定其病毒效价。S3-T1组疫苗37℃耐老化至16 d,效价损失在1.0滴度以内;D4组配苗37℃保存11 d后病毒滴度损失小于0.7,均符合耐老化要求。2猪瘟活疫苗泡沫干燥剂型的研究泡沫干燥保护剂以海藻糖、明胶为主要配方成分,通过单因素变量试验,以配方形态、干燥疫苗形态、残余水份含量为指标,筛选出泡沫干燥猪瘟活疫苗的耐热保护剂配方。从基础配方中挑选出T28C系列作为猪瘟泡沫干燥疫苗耐热基础配方,然后对其进行成分调整和工艺优化,通过进一步的兔体温热实验进行疫苗耐老化的效价检测,选出T28C-16和T28C-38两个耐热保护剂配方。选出配方后,分别对泡沫一次干燥和二次干燥程序进行调整和优化。对一次干燥发泡的关键阶段300～200Pa之间维持的时间进行调整,发现维持10min时效果最好,二次干燥的时间分别以40、42和44 h进行筛选,结果表明,40 h时产品的残余水份大于4%,不符合要求,干燥42h和44h产品残余水份均满足要求,而时间越长成本越高,所以最佳干燥时间为42 h。确定理想配方和最佳工艺后干燥3批次产品,进行耐老化测定,测得T28C-16保护剂可使猪瘟泡干疫苗耐老化37℃15 d滴度下降小于1.0,T28C-38保护剂可使猪瘟泡干疫苗耐老化37℃ 20 d滴度下降小于1.0。保护剂对兔体的干扰性试验表明单纯配方均未引起家兔的热反应,证明所获配方对兔体热反应无影响。