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通过课题组前期实验得出东北地道中药材五味子、关防风的农药残留的情况进行研究,五味子药材中残留的有机氯农药含有六氯苯(HCB)、β-六六六(β-BHC)和p,p’-滴滴涕(p,p’-DDT),残留量分别为33.2ug/kg、63.1ug/kg、31.2ug/kg。关防风药材中残留的有机氯农药含有β-六六六((β-BHC)、六氯苯(HCB)和p,p’-滴滴涕(p,p’-DDT),残留量分别为42.35ug/kg、42.35ug/kg、35.83ug/kg。根据中国药典2010年版规定五味子、关防风药材中六六六总含量不得高于200μg/kg,DDT总含量不得高于200μg/kg,六氯苯HCB总含量不得高于100μg/kg。从样品的测定结果可以看出:不论是五味子还是关防风残留的农药六六六、HCB和DDT单独一种都没有超出国家标准,但从五味子和关防风药材中所得的农药提取物是六六六、HCB和DDT的混合物。近些年来,多数人致力于单一农药残留的毒性研究,对混合农药残留的毒性研究的报道较少,而在实际应用中农药大多是混配后使用,混配后农药残留的毒性对人体的危害作用是相加还是抑制是一个值得探讨的问题。所以本文对防风、五味子中含有的六六六、HCB和DDT农药残留作用于乳腺癌细胞,观察对乳腺癌细胞是否有增殖的情况来评价五味子、关防风中残留农药的环境雌激素效应。本实验首先采用MTT法检测五味子、关防风中残留的农药对乳腺癌细胞生长的影响;采用Western Blot法测定关防风、五味子中残留的农药对乳腺癌细胞ERK1/2、p-ERK1/2蛋白表达水平的影响情况,分析残留农药的作用机制。MTT结果显示,关防风中残留农药作用于乳腺癌细胞,给药24小时,增殖率达139.8%,与对照组相比具有显著性差异(P<0.05)。给药48小时,增殖率为140.8%,与对照组相比具有极显著性差异(P<0.01)。给药72小时,增殖率为120.5%,与对照组相比具有显著性差异(P<0.05);五味子中残留农药作用于乳腺癌细胞,给药24小时,增殖率为143.8%,与对照组具有显著性差异(P<0.05)。给药48小时,增殖率为144.5%,与对照组相比具有极显著性差异(P<0.01)。给药72小时,增殖率为126.0%,与对照组相比有极显著性差异(P<0.01)。Western Blot结果表明:关防风中残留农药作用乳腺癌细胞48小时后,细胞中ERK1/2、p-ERK1/2蛋白表达量增加,与阴性对照组比较有显著差异(P<0.05),故得出结论,关防风中残留农药通过级联反应激活乳腺癌细胞中ERK1/2,当激活的乳腺癌细胞中的ERK1/2被磷酸化后,磷酸化的ERK1/2被运输至细胞核,作用于细胞核内的转录因子,调控目的基因的表达,而产生乳腺癌细胞的增殖。五味子中残留农药作用乳腺癌细胞48小时后,细胞中ERK1/2、p-ERK 1/2蛋白表达量增加,ERK1/2 与阴性对照组比较具有显著差异(P<0.05),p-ERK1/2 与阴性对照组比较具有显著差异(P<0.01)。故得出结论,五味子中残留农药通过级联反应激活乳腺癌细胞中ERK1/2,当激活的乳腺癌细胞中的ERK1/2被磷酸化后,磷酸化的ERK1/2被运输至细胞核,与细胞核内的转录因子结合,调控目的基因的表达,而产生乳腺癌细胞的增殖,故引起生殖毒性。