本研究以野油菜黄单胞菌的野生α-淀粉酶基因和采用 5-溴脱氧尿苷三磷酸（BrdUTP）在野生基因基础进行体外诱变后所得的酶活提高的基因为研究对象,利用基因重组技术,成功构建了重组表达载体 pXC8004N 和 pXCH21N,并在大肠杆菌中实现了高效表达,同时对重组菌破碎后所得的粗酶液的酶学特性进行了分析研究。 1．利用原核表达载体 pET-30a(+)构建重组表达载体 pXC8004 和 pXCH21，转化到宿主菌 BL21 中，利用 IPTG 诱导，使α-淀粉酶基因获得了高效表达。通过对表达条件的摸索，当菌体 OD600为 0.4～0.6 时，IPTG 终浓度为 1mmol/L时诱导结果最好，表达量约占菌体总蛋白的 11%，诱导表达温度以 26℃诱导培养时可减少包涵体的形成。 2．重组菌株诱导表达后，调整二者的菌体 OD600相同,利用超声波破碎细胞后，测定这两种粗酶液的酶活，比较二者之间的差别。在表达量相同的情况下，诱变后的高酶活基因重组菌的酶活性比初始基因重组菌的酶活性高30u/mL 。这说明突变位点处于酶活性部位，通过改变酶与底物的作用效果而提高酶的活性。 3. 本试验设计的一对引物由于在起始密码子前多了一个碱基,致使构建好的重组表达载体在翻译外源基因时发生了移码错误翻译,导致蛋白质的翻译在 616 个碱基处遇到了 TAG 终止密码子,提前终止了翻译,产生了两个大小为 24KDa 的错码蛋白质。测这两个蛋白的α－淀粉酶活性时发现其具有能够水解淀粉的能力，也就是说这两个蛋白能够切开α-1、4 糖苷键，经测定这两个蛋白的酶活性可达到 105U/mL。将这两个蛋白的氨基酸序列与野油菜黄单胞菌的野生α－淀粉酶基因的氨基酸序列比对发现它们之间同源性只有 8％左右。