俄罗斯鲟(Acipensergueldenstaedti),在分类地位上属于硬骨鱼纲,辐鳍亚纲,鲟形目。我国在二十世纪九十年代开始引入,由于鲟鱼具有良好的营养价值、经济价值,近几年俄罗斯鳄的养殖规模迅速扩大,产量不断提高。快速发展的鲟鱼养殖业需要有高效的配合饲料来作为物质保障,但迄今对其各阶段营养需求和饲料配方的研究却很匮乏。据此,本文重点研究了饲料中添加不同脂肪源对俄罗斯鲟幼鱼生长性能、抗氧化能力和脂类代谢的影响;探讨了俄罗斯鲟幼鱼对饲料亚麻酸(linolenic acid)、亚油酸(linoleic acid)最适需要量及其两者的合理搭配,以及饲料中n-3系高不饱和脂肪酸(Highly unsaturated fatty acids,HUFA)最适添加量,由此探究俄罗斯鲟的必需脂肪酸类型、必需脂肪酸的种类和需要量。研究成果可为完善俄罗斯鲟鱼的营养生理学资料、人工配合饲料的合理配制和养殖生产提供理论依据。1.不同脂肪源对俄罗斯鲟幼鱼生长、抗氧化和脂类代谢的影响以俄罗斯鲟幼鱼(1.39±0.15g)作为研究对象,配制了六组等氮等能的饲料来研究不同脂肪源对俄罗斯鲟幼鱼生长、抗氧化和脂类代谢的影响。脂肪的添加比例为9%,脂肪源分别选用鱼油(Fish oil,FO)、牛油(Beef tallow,BT)、亚麻籽油(Linseed oil,LO)、葵花籽油(Sunflower oil,SO)和两组混合油组FSB(FO:SO:BT=1:1:1)、LSB(LO:SO:BT=1:1:1)。经过 56 天的养殖实验后,结果发现LSB组俄罗斯鲟增重率和特定生长率最高,肝体比最低(P<0.05)。SO组俄罗斯鲟全鱼脂肪酸中n-6多不饱和脂肪酸(Polyunsaturated fatty acids,PUFA)含量最高,LO组全鱼脂肪酸中n-3PUFA最高,FO组全鱼的n-3HUFA含量最高(P<0.05)。血清指标中,FO组和BT组的甘油三酯含量高于其他各组。LSB组鳄鱼的肝脏脂肪酶(Lipase,LPS)、苹果酸脱氢酶(Malate dehydrogenase,MDH)和脂蛋白酯酶(Lipoprotein lipase,LPL)的活力处于各组的最高水平(P<0.05)。抗氧化指标显示,LSB组鲟鱼血清中的丙二醛(MDA)含量与BT、LO和FSB组无显著性差异(P>0.05),但是显著低于FO和SO组(P<0.05)。LSB组血清过氧化氢酶(Catalase,CAT)和总抗氧化能力(Total antioxidant capacity,T-AOC)高于FO和FSB组,与其他几组无显著性差异(P>0.05)。以上实验结果表明,饲料中亚麻籽油、葵花籽油和牛油等比例混合的脂肪源能促进俄罗斯鲟幼鱼的生长、提高机体的抗氧化能力,促进体内的脂类代谢和利用,可以作为配合饲料的理想候选脂肪源。2.饲料中添加不同含量的亚油酸、亚麻酸对俄罗斯鲟幼鱼生长、抗氧化和脂类代谢的影响实验以俄罗斯鲟幼鱼(9.59±0.19g)作为研究对象,探究了饲料中不同亚油酸(Linoleic,LA)、亚麻酸(Linolenic,LN)的添加量对其生长、抗氧化和脂类代谢的影响,实验为期八周。实验设置共十组饲料,分别使用葵花籽油作为亚油酸的提供源,紫苏油作为亚麻酸的提供源。脂肪添加水平为10%,对照组全部使用椰子油。其他各组的亚油酸和亚麻酸的添加量分别为0.5%LA+ 0%LN,1.0%LA+0%LN,2.0%LA+0%LN,0%LA+0.5%LN,0%LA+1.0%LN,0%LA+2.0%LN,0.25%LA+0.25%LN,0.5%LA+0.5%LN,1.0%LA+1.0%LN。结果发现:投喂添加1.0%LA+1.0%LN饲料的处理组,鲟鱼的增重率显著高于其他各组(P<0.05)。饲料中添加0%LA+0%LN处理组和0%LA+2.0%LN处理组的增重率处于各组最低水平(P<0.05),但与0%LA+1.0%LN组无显著性差异(P>0.05)。各组的存活率、肥满度和肝体比之间没有显著性差异。随着饲料中亚油酸含量的提高,全鱼脂肪酸中n-6PUFA含量增加,同样地,随着饲料中亚麻酸含量的增加,全鱼脂肪酸中n-3PUFA含量增加,且在2%LN组中达到最高。血清甘油三酯和胆固醇含量在1.0%LA+1.0%LN组处于最低水平(P<0.05)。1.0%LA+1.0%LN组的脂蛋白酯酶和脂肪酶活性显著高于其他各组,而苹果酸脱氢酶活性显著低于其他各组(P<0.05)。抗氧化指标中,1.0%LA+1.0%LN组鲟鱼的过氧化氢酶、超氧化物岐化酶(Superoxide dismutase,SOD)活性和总抗氧化能力处于各组的最高水平。结果显示,俄罗斯鲟幼鱼同时需要亚油酸和亚麻酸,当饲料中同时添加1.0%亚油酸和1.0%亚麻酸时,可显著提高鲟鱼的生长率和抗氧化能力,促进脂类代谢和营养物质的利用效率。3.俄罗斯鲟幼鱼对亚麻酸的最适需要量实验以俄罗斯幼鱼(11.68±0.13g)作为研究对象,探究俄罗斯鲟幼鱼对亚麻酸的最适需求量,实验为期八周。饲料中使用亚麻籽油作为亚麻酸的提供源,设置的亚麻酸的添加比例为0%、0.5%、1.0%、1.5%和2.0%。实验结果显示,0.5%和1.0%添加组鲟鱼的增重率和特定生长率显著高于其他各组,饵料系数显著低于其他各组(P<0.05)。2.0%添加组鲟鱼的增重率最低,0%组的饵料系数在各组中处于最高水平(P<0.05)。各组之间存活率、肝体比和脏体比没有显著性的差异(P>0.05)。以亚麻酸添加比例和增重率做线性回归分析,得出俄罗斯鲟幼鱼对亚麻酸的最适需求量为0.69%。试验同时发现,血清中MDA的含量,0.5%组显著低于其他各组,1.0%显著高于其他各组(P﹤0.05),而CAT活力与MDA的变化趋势一致。各组血清中SOD的活性,0.5%组处于最高水平,T-AOC也显著高于1.5%和2.0%组(P<0.05)。从肝脏脂类代谢酶活性测定结果可以看出,0.5%组MDH处于各组最高水平,而LPL处于各组最低水平,LPS的活性则显著低于1.0%和2.0%组(P<0.05)。肝脏脂肪酸分析结果可以看出,随着饲料中亚麻酸含量的增多,C18:3n-3的含量也显著提高(P<0.05)。血清脂类含量中,2.0%组的甘油三酯(Triglyceride,TG)和胆固醇(Cholesterol,CHO)均显著高于其他各组。0.5%组的CHO和低密度脂蛋白(Low density lipoprotein,LDL)均处于较低水平。高密度脂蛋白(High density lipoprotein,HDL)各组之间没有显著性差异(P>0.05)。实验结束时检测了 0、1.0和2.0%组鱼体肝脏中△ 6脂肪酸去饱和酶(△ 6 Fatty acid desaturase,△6FAD)和碳链延长酶 5(Elongasesofverylongchainfattyacids5,ELOVL5)的荧光定量表达,结果显示随着亚麻酸添加量的增多,两者的表达量均增加。结果表明,俄罗斯鲟幼鱼对亚麻酸的最适需求量为0.5%-1.0%之间,以增重率为评价指标可知,当亚麻酸的添加量为0.69%时,俄罗斯鲟幼鱼获得了最大的生长率。4.俄罗斯鳄幼鱼对亚油酸的最适需要量实验以俄罗斯幼鱼(11.66±0.14g)作为研究对象,探究俄罗斯鲟幼鱼对亚油酸的最适需求量,实验为期八周。饲料中使用葵花籽油作为亚油酸的提供源,共设计了六个梯度,分别为0、0.5、1.0、1.5、2.0、2.5%。实验结果显示,1.0%组鲟鱼增重率和特定生长率显著高于其他各组,2.5%组显著低于其他各组(P<0.05)。1.0%组饲料系数显著低于0%、2.0%和2.5%组,与0.5%和1.5%组没有显著性差异。肝体比、脏体比、存活率和肥满度之间没有显著性差异(P>0.05)。以亚麻酸添加水平与增重率作线性回归分析得出,俄罗斯鲟幼鱼对亚油酸的最适需求量为1.15%。抗氧化指标中,血清MDA的含量1.0%和1.5%组显著低于2.5%组(P<0.05),与其他各组没有显著性差异(P>0.05)。1.0%组SOD活性显著低于其他各组。1.5%组CAT活性显著低于其他各组。0%组的总抗氧化能力处于各组最低,1.0%组处于各组最高水平(P<0.05)。血清中甘油三酯和胆固醇的含量均随着亚油酸含量的增加呈现先升高后下降的趋势,且都在1.5%组达到峰值。LDL含量亚油酸1.5%添加组显著高于其他各组,0.5%组处于各组最低水平。HDL各组之间没有显著性的差异(P﹥0.05)。肝脏中脂类代谢酶的活性,1.0%亚油酸添加组的LPS和LPL活性均处于各组的最高水平,MDH活性显著低于2.0%添加组,与1.5%添加组没有显著性的差异,但是显著高于其他几组(P<0.05)。实验结束检测了 0、1.0和2.0%△6脂肪酸去饱和酶(△6FAD)和碳链延长酶5(ELOVL5)的荧光定量表达,结果显示随着亚油添加量的增多,两者的表达量均增加。综合结果显示,俄罗斯鲟幼鱼对亚油酸的最适需求量在1.0%-1.5%之间,以增重率为判据,当亚油酸添加量为1.15%时,俄罗斯鲟幼鱼的生长处于最高水平。5.俄罗斯鲟幼鱼对亚油酸、亚麻酸的最适需求比例实验以俄罗斯幼鱼(11.67±0.12g)作为研究对象,探究俄罗斯鲟幼鱼对亚油酸、亚麻酸的最适需求比例,实验为期八周。饲料使用葵花籽油和亚麻籽油分别作为亚油酸和亚麻酸的提供源。共设计了五个亚油酸/亚麻酸比例,分别为亚油酸/亚麻酸=1:0,2:1,1:1,1:2,0:1(记为 G1-0,G2-1,G1-1,G1-2,G0-1)。实验结束后,分析结果发现,G2-1组的增重率和特定生长率显著高于其他各组,G1-2和G0-1组处于各组最低水平(P<0.05)。G2-1组的饵料系数显著低于其他各组,G1-0和G0-1组饵料系数处于各组最高水平。肥满度、肝体比和脏体比各组之间没有显著性差异(P>0.05)。抗氧化性能中,MDA的含量,G2-1显著低于其他各组(P<0.05),但是与G0-1组无显著性差异(P>0.05)。SOD活性,G2-1组与G1-1组无显著性差异(P﹥0.05),但是显著高于其他各组(P<0.05)。CAT活性中,G1-1组处于各组最高水平,而G1-2组处于各组最低水平(P<0.05)。G2-1和G1-1的总抗氧化能力显著高于其他各组(P<0.05),其他各组之间无显著性差异(P>0.05)。肝脏中MDH的活性,G2-1组与G1-2组无显著性差异(P>0.05),但是显著低于G0-1组,高于G1-0和G0-1组(P<0.05)。LPL活性G2-1组显著高于其他各组,G1-1组处于各组最低水平(P<0.05)。LPS的活性,G2-1和G1-2组均处于各组最高水平,G1-0和G0-1组显著低于其他各组(P<0.05)。血清脂类含量中,TG和LDL的含量G2-1和G1-0组无显著性差异(P﹥0.05),显著低于其他各组(P<0.05)。G2-1组的CHO含量处于各组最低水平,而G1-2组处于各组最高水平(P<0.05)。HDL含量各组之间无显著性差异(P>0.05)。实验结果显示△ 6 FAD基因在G2-1组处表达量最高(P<0.05),而在G1-0组表达量最低(P>0.05),但与G0-1组无显著性差异(P﹥0.05)。G2-1组ELOVL5基因表达量也处于各组最高水平(P<0.05),但与G1-2组无显著性差异(P﹥0.05),G0-1组ELOVL5基因表达量也处于各组最低水平(P<0.05)。综上所述,当亚油酸和亚麻酸比例为2:1时,能促进俄罗斯鲟幼鱼的生长、提高抗氧化能力和脂类代谢的效率。6.俄罗斯鳄幼鱼对n-3HUFA的最适添加量实验选取俄罗斯鲟幼鱼(7.42±0.73g)为研究对象,探究俄罗斯鲟幼鱼饲料中n-3HUFA的最适添加量。实验选取鱼油为n-3HUFA的提供源,设置添加比例为0、0.3、0.6、0.9和1.2%。实验为期八周,实验中总脂肪添加量为10%,脂肪源为亚麻油添加1.0%,葵花籽油添加为1.5%,鱼油按设置n-3HUFA梯度换算后添加,并用月硅酸平衡。实验结果显示,0.3、0.6、0.9和1.2组增重率无显著性差异,显著高于0添加组。0.3%添加组的饵料系数处于各组的最低水平,0.9添加组显著高于其他各组(P<0.05)。0.3%添加组鲟鱼的肥满度显著高于0.9%添加组(P<0.05),与其他各组无显著性差异(P﹥0.05)。各组之间的存活率、肝体比和脏体比无显著性差异(P>0.05)。抗氧化指标中,0.9%添加组血清中的MDA含量显著高于其他各组(P<0.05),其他各组之间无显著性差异。0%添加组血清中SOD活性显著低于其他各组(P<0.05),其他各组之间无显著性差异(P>0.05)。0%和0.9%添加组血清中CAT活性处于各组最低水平,而0.3%添加组的CAT活性处于各组最高水平(P<0.05)。总抗氧能力中,0.3与0.6、0.9和1.2%添加组之间无显著性差异(P>0.05),但显著高于0%添加组。肝脏中MDH的活性,0.3%和0.6%添加组显著高于其他各组,1.2%组处于各组最低水平(P<0.05)。LPL的活性随着n-3HUFA的添加呈下降趋势,0%最高,0.9和1.2%添加组最低。0%添加组的LPS活性也处于各组最高水平(P<0.05),0.9%组与1.2%组无显著性差异(P﹥0.05),处于各组最低水平。血清中LDL的含量随着n-3HUFA添加量的增加而减少,0%添加组最高,而1.2%处于各组最低水平(P<0.05)。血清中TG、CHO、HDL各组之间无显著性差异(P>0.05)。综上所述,从生长结果看,添加n-3HUFA对俄罗斯鳄幼鱼生长具有促进作用。综合生长指标、抗氧化力和脂类代谢指标来看,俄罗斯鲟幼鱼饲料中n-3HUFA的最适添加量为0.3%-0.6%。