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骨髓增生异常综合征(myelodysplastic syndrome,MDS)是一组异质性克隆性造血系统疾病。临床表现有“无效造血”、外周血细胞减少、克隆性染色体异常及高度向白血病进展的倾向。有研究表明:MDS骨髓细胞有过度凋亡或“流产样生长”的特性。目前国内外研究的与MDS骨髓细胞凋亡相关的因子主要有肿瘤坏死因子-a (TNF-a)、肿瘤坏死因子相关诱导凋亡配体(TRAIL)、Fas及Fas配体、nuclear factor-kappa B (NFκB) ,Caspase-3、B cell lymphoma/leukemia-2 (BCI-2)等,这些因子可能通过其不同信号转导途径促进或抑制了MDS骨髓细胞的凋亡,在MDS的发病发展过程中起一定的作用,但具体机制目前尚不清楚。TLR4(toll-like receptor-4)是TLRs家族中的一员,在宿主的天然免疫及获得性免疫反应的信号转导途径中有重要作用。近来发现TLR4基因表达与细胞凋亡有关,有研究发现TLR4基因表达对胃癌细胞及神经胶质细胞的凋亡有促进作用。骨髓增生异常综合症患者存在骨髓细胞凋亡增加的情况,除上述相关因子外,TLR4基因表达是否也与MDS骨髓细胞凋亡有关?在国内尚无此方面的报道。我们将TLR4 mRNA在MDS患者骨髓单个核细胞中的表达情况和骨髓细胞凋亡水平的关系作一探讨。而且,我们检测治疗后6个月患者骨髓细胞TLR4mRNA的表达水平,探讨其与MDS临床疗效的关系。目的:研究TLR4基因在MDS骨髓细胞表达情况;检测MDS骨髓细胞凋亡情况;TLR4基因表达与MDS骨髓细胞凋亡之间的关系;研究治疗前后TLR4基因在MDS骨髓细胞的表达变化,观察其与临床疗效的关系。方法: 1采用实时荧光定量PCR方法检测初治MDS患者、治疗后6个月MDS患者及对照组骨髓细胞TLR4mRNA表达情况。2采用Annexin-V/FITC试剂盒检测初治MDS患者、对照组患者骨髓细胞的凋亡情况。结果:1各组中TLR4 mRNA的表达情况初治低危组MDS患者骨髓细胞TLR4 mRNA表达水平0.325-0.891,平均水平0.638±0.159,对照组患者骨髓细胞TLR4 mRNA表达水平0.198-0.471,平均水平0.282±0.070,低危组MDS患者TLR4 mRNA表达水平明显高于对照组,差别有统计学意义(t’=-8.44,p<0.0001)。初治中高危组MDS患者骨髓细胞TLR4 mRNA表达水平0.189-0.457,平均水平0.287±0.083 ,与对照组相比无统计学差异(t’=-0.18,p=0.860)。初治低危组MDS患者骨髓细胞TLR4 mRNA表达水平明显高于中高危组,差别有统计学差异(t’=7.46,p<0.0001)。2各组中骨髓细胞凋亡情况初治低危组MDS患者骨髓细胞凋亡水平8.35%-31.24%,平均水平22.78±6.69%,对照组凋亡水平3.35%-12.20%,平均水平7.428±2.675%,MDS低危组骨髓细胞凋亡水平明显高于对照组,差别有统计学意义(t’=-8.71,p<0.0001)。初治中高危组MDS患者骨髓细胞凋亡水平4.26%-17.14%,平均水平8.442±3.643%,与对照组相比无统计学差异(t’=-0.96,p=0.3433)。初治低危组MDS患者骨髓细胞凋亡水平明显高于中高危组,差别有统计学意义(t’=-7.1,p<0.0001)。3各组TLR4 mRNA的表达水平与骨髓细胞凋亡水平的关系初治低危组中TLR4 mRNA的表达水平与骨髓细胞凋亡水平呈正相关,相关系数为r=0.654,p=0.006,有统计学意义。初治中高危组MDS患者TLR4 mRNA的表达水平与骨髓细胞凋亡水平的相关系数为r=-0.270,p=0.422,无统计学意义。4治疗前后TLR4 mRNA的表达与临床疗效的关系4.1 TLR4 mRNA的表达与低危组临床疗效的关系低危组MDS患者16例,治疗后6个月临床疗效观察(按国内疗效标准):完全缓解(CR)5例、部分缓解(PR)5例、血液学进步(HI)3例、未缓解(NR)3例。治疗后低危组MDS患者骨髓细胞TLR4 mRNA的表达水平0.203-0.779,平均水平0.354±0.179,治疗前表达水平0.325-0.891,平均水平0.634±0.159,治疗后低危组的表达水平与治疗前相比明显降低,差异有统计学意义(t’=-4.73,p<0.0001)。其中,治疗后CR组、PR组和HI组骨髓细胞TLR4 mRNA的表达水平与治疗前相比均明显下降,差别有统计学意义( t’=-7.61,p=0.0007 )、(t’=-3.54,p=0.0122)、(t’=-4.11,p=0.0274)。而治疗后NR组的表达水平与对照组相比无统计学差异(t’=-0.12,p=0.9099)。4.2 TLR4 mRNA的表达与中高危组临床疗效的关系中高危组MDS患者11例,治疗后6个月临床疗效观察:CR 3例、PR 2例、HI 4例、NR 2例。治疗后中高危组MDS患者骨髓细胞TLR4 mRNA的表达水平0.199-0.358,平均水平0.280±0.051,治疗前中高危组的表达水平0.189-0.457,平均水平0.287±0.083,治疗后中高危组的表达水平与治疗前相比无统计学差异(t’=-0.22,p=0.8290)。其中CR组、PR组、HI组和NR组骨髓细胞TLR4 mRNA的表达水平与各组治疗前相比亦无统计学差异( t’=0.42,p=0.7157 )、( t’=-0.33,p=0.7979 )、( t’=0.50,p=0.6357 )、(t’=-0.52,p=0.6937)。结论:1初治MDS低危组骨髓细胞TLR4 mRNA的平均表达水平明显高于对照组和中高危组,初治MDS中高危组骨髓细胞TLR4 mRNA的平均表达水平与对照组相比无明显差别。2低危组MDS骨髓细胞凋亡率高于对照组和中高危组,中高危组MDS骨髓细胞凋亡率与对照组相比无明显差别。3低危组MDS TLR4 mRNA的表达水平与骨髓细胞凋亡率呈正相关,相关系数为r=0.654(p<0.05),MDS中高危组TLR4 mRNA的表达水平与骨髓细胞凋亡率无相关性。4治疗后低危组MDS患者骨髓细胞TLR4 mRNA平均表达水平明显低于治疗前平均水平。其中CR组、PR组和HI组骨髓细胞TLR4 mRNA表达水平与治疗前相比均明显下降,而NR组表达水平与治疗前相比无明显差异。治疗后中高危组MDS患者骨髓细胞TLR4 mRNA平均表达水平与治疗前相比无明显差异,其中CR组、PR组、HI组和NR组表达水平与治疗前相比均无明显差异。