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主动脉夹层(aortic dissection,AD)病情凶险,没有有效的药物治疗,病死率高。AD的发病机制是目前的研究热点之一。我们联合应用β-氨基丙腈(BAPN)和血管紧张素Ⅱ(Ang Ⅱ)两种药物,能够建立稳定的大鼠主动脉夹层模型,而且其发病机理类似人类主动脉夹层的发病机理。在建立大鼠AD模型基础上,以大鼠AD血管及人AD血管为研究对象,通过牵张实验,我们发现在离体组织中机械牵张力会使AD血管平滑肌细胞(VSMCs)发生表型转化,这种表型转化程度在一定范围内受牵张力大小的影响而与牵张时间长短无关。应用牵张离子通道(SAC)阻滞剂和AKT2阻滞剂后,VSMCs表型的转化不再受牵张力的影响。因此我们认为:机械牵张开放SAC后,通过AKT2信号传导通路促使VSMCs发生表型的转化。第一部分联合应用β-氨基丙腈(BAPN)和血管紧张素Ⅱ(Ang Ⅱ)建立SD大鼠主动脉夹层模型。目的联合应用BAPN和Ang Ⅱ两种药物建立SD大鼠主动脉夹层动物模型,用于研究主动脉夹层的发病机理。方法实验分为3组:对照组、药水组和灌胃组。每组30只3周龄的SD大鼠。对照组自由饮食饮水;药水组将BAPN按1g/Kg/day的药量溶解入大鼠的饮用水中,进食普通大鼠饲料;灌胃组自由饮食饮水,将BAPN按1g/Kg/day的量灌入大鼠胃内。4周后,当大鼠7周龄时,所有大鼠均停止喂药,在腹部皮下植入药物缓释泵。对照组药物缓释泵内装入0.9%的生理盐水;药水组和灌胃组的药物缓释泵内均装入Ang Ⅱ,使其走速达到1ug/Kg/min。1周后全部幸存大鼠麻醉后取主动脉血管,进行病理检查,看是否有主动脉夹层的形成。在实验过程中,所有死亡的大鼠均第一时间解剖,取出主动脉,进行病理检查。结果对照组30只大鼠无主动脉夹层形成,无死亡,体重从53.4±3.6(g)上升到171.3±5.9(g);药水组30只大鼠有5只产生主动脉夹层,其中3只死于主动脉夹层破裂,夹层形成率16.7%,体重从53.2±4.4(g)上升到62.7±3.6(g);灌胃组30只大鼠有15只产生主动脉夹层,其中12只死于主动脉夹层破裂,夹层形成率50%,体重从53.1±4.0(g)上升到103.6±3.2(g)。结论联合BAPN及Ang Ⅱ两种药物建立大鼠主动脉夹层模型,简单易行,而且其发病机理类似人类主动脉夹层发病机理,因此这一建模方法是简单可行的,能为主动脉夹层的发病机制研究提供模型基础。第二部分机械牵张通过牵张离子通道(SAC)引起主动脉夹层血管平滑肌细胞(VSMC)表型转化的机制研究目的探讨机械牵张是否通过SAC开放引起主动脉夹层血管VSMCs表型转化。方法95只3周龄健康Sprague-Dawley(SD)幼年大鼠(体重50.8±3.2g)用于建立AD模型,以建模成功大鼠的主动脉夹层血管和16例AD患者的主动脉夹层血管为研究对象进行牵张实验。分为对照组(不加SAC阻滞剂)和实验组(加SAC阻滞剂)。对照组分别用0g、1g、3g、5g四个不同牵张力牵张主动脉夹层血管,每组牵张力分别牵张0.5h、1h和2h,然后收集标本;实验组是先用SAC阻滞剂干预主动脉夹层血管1h后,再分别用0g、1g、3g、5g四个不同牵张力牵张,每组牵张力分别牵张0.5h、1h和2h,然后收集标本。用western blot法和免疫组化法检测VSMCs表型相关蛋白:收缩型相关蛋白α-SMA、Calponin、SM-MHC和合成型相关蛋白OPN、Smemb、Epiregulin的表达。结果在离体的主动脉夹层血管组织中,大鼠VSMCs收缩型标志物蛋白的表达随着牵张力的增加而减少,当牵张力为3g时降到最低,5g时表达有回升,人VSMCs收缩型标志物蛋白的表达也是随着牵张力的增加而减少,当牵张力为5g时降到最低值;大鼠VSMCs合成型标志物蛋白的表达则随着牵张力的增加而增加,当牵张力为3g时达到最高值,5g时表达有回落,人VSMCs合成型标志物蛋白的表达随着牵张力的增加而增加,5g时达到最大值。但是这些表现均能被SAC阻滞剂(Gdcl3/硫酸链霉素)抑制,在加入SAC阻滞剂干预AD血管后,VSMCs表型相关标志物蛋白的表达不再受牵张力的影响。同时我们发现牵张时间的长短与VSMCs表型相关标志物蛋白表达的多少没有明显的关系。结论在离体组织中,机械牵张通过开放SAC而引起大鼠和人主动脉夹层血管VSMCs发生表型转化。牵张力和表型转化之间在一定范围内呈线性依赖关系:大鼠主动脉夹层血管在3g牵张力时达到极点,而人主动脉夹层血管在5g牵张力时达到极点。不同的牵张时间对VSMCs表型转化没有明显影响。第三部分机械牵张开放SAC后通过AKT2信号通路引起主动脉夹层VSMCs表型转化的机制研究目的探讨机械牵张开放SAC后是否通过AKT2信号通路引起主动脉夹层VSMCs表型转化。方法90只3周龄健康Sprague-Dawley(SD)幼年大鼠(体重50.2±4.2g)用于建立AD模型,以建模成功大鼠的主动脉夹层血管和15例AD患者的主动脉夹层血管为研究对象进行牵张实验。分为对照组(不加AKT2阻滞剂)和实验组(加AKT2阻滞剂)。对照组分别用0g、1g、3g、5g四个不同牵张力牵张主动脉夹层血管,每组牵张力分别牵张0.5h、1h和2h,然后收集标本;实验组是先用AKT2阻滞剂干预主动脉夹层血管1h后,再分别用0g、1g、3g、5g四个不同牵张力牵张,每组牵张力分别牵张0.5h、1h和2h,然后收集标本。用western blot法和免疫组化法检测AKT2蛋白、AKT磷酸化相关蛋白(P-AKT)以及VSMCs表型相关标志物蛋白的表达。结果在离体的主动脉夹层血管组织中,大鼠AKT2蛋白、P-AKT蛋白和VSMCs收缩型标志物蛋白的表达随着牵张力的增加而减少,当牵张力为3g时降到最低,5g时表达有回升,人AKT2蛋白、P-AKT蛋白和VSMCs收缩型标志物蛋白的表达也是随着牵张力的增加而减少,当牵张力为5g时降到最低值;大鼠VSMCs合成型标志物蛋白的表达则随着牵张力的增加而增加,当牵张力为3g时达到最高值,5g时表达有回落,人VSMCs合成型标志物蛋白的表达随着牵张力的增加而增加,5g时达到最大值。但是这些表现均能被AKT2阻滞剂CCT128930抑制,在加入CCT128930干预AD血管后,AKT2蛋白、P-AKT蛋白和夹层血管VSMCs表型相关标志物蛋白的表达不再受牵张力的影响。同时我们也发现牵张时间的长短与VSMCs表型相关蛋白表达的多少没有明显的关系。以上变化与牵张引起SAC开放后引起的VSMCs表型转化的发生规律是一样的。结论在离体组织中,机械牵张通过AKT2信号通路可以使夹层血管组织的AKT2蛋白、P-AKT蛋白的表达量发生变化,能使夹层血管VSMCs表型发生转化,牵张力和AKT2蛋白、P-AKT蛋白的表达量以及VSMCs表型转化之间在一定范围内呈线性依赖关系:大鼠主动脉夹层血管在3g牵张力时达到极点,而人主动脉夹层血管在5g牵张力时达到极点。不同的牵张时间对AKT2蛋白、P-AKT蛋白的表达量以及VSMCs表型转化没有明显影响。我们认为机械牵张开放SAC后通过AKT2信号通路来促使VSMCs表型发生转化。