大豆抗原蛋白对断奶仔猪血清中细胞因子的影响及肠道致敏作用

来源 :安徽农业大学 | 被引量 : 4次 | 上传用户:gw678
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本试验将不同剂量纯化p-伴大豆球蛋白(7S)和大豆球蛋白(11S)添加到断奶仔猪日粮中,建立不同程度致敏仔猪模型,采用ELISA、石蜡切片、免疫组织化学以及实时荧光定量PCR方法,研究大豆抗原蛋白对断奶仔猪血清中细胞因子、肠道黏膜形态、紧密连接Claudin-1蛋白及其基因相对表达量的影响,探讨β-伴大豆球蛋白和大豆球蛋白对断奶仔猪的致敏作用。选取70头24日龄“杜×长×大”三元杂交断奶仔猪,采用随机分组设计,分成7个组,每组10头仔猪。所有仔猪于24日龄断奶并称量体重,开始饲喂试验日粮。A组为对照组,饲喂基础日粮;B、C、D组仔猪分别饲喂基础日粮+500 μg/kg·W β-伴大豆球蛋白、基础日粮+2000 μg/kg·W β-伴大豆球蛋白和基础日粮+5000 μg/kg·W β-伴大豆球蛋白;E、F、G组仔猪分别饲喂基础日粮+500 μg/kg·W大豆球蛋白、基础日粮+2000 μg/kg·W大豆球蛋白和基础日粮+5000μg/kg·W大豆球蛋白。在26、28、30日龄经前腔静脉采血,用于测定血清中细胞因子IL-2、IL-4、IL-6、IL-8和IFN-y含量。在31日龄时,各试验组分别选取5头仔猪前肢动脉放血致死,剪取十二指肠、空肠和回肠组织,分成2份,其中1份迅速放入4%多聚甲醛保存,用于石蜡切片制作及小肠上皮细胞紧密连接蛋白Claudin-1免疫组织化学检测;另1份迅速放入液氮中保存,用于小肠上皮细胞紧密连接蛋白Claudin-1 mRNA表达量的qPCR检测。结果表明:1、添加2000μg/kg·W 5000μg/kg·W剂量7S和添加5000μg/kg·W剂量11S可显著提高仔猪血清中IL-2、IL-4、IL-6的含量(P<0.05或P<0.01),显著降低仔猪血清中IFN-γ的含量(P<0.05或P<0.01);添加5000μg/kg·W剂量的7S和11S可显著升高仔猪血清中IL-8的含量(P<0.05);添加500 μg/kg·W剂量的7S和11S对仔猪血清中IL-2、IL-4、IL-6、IL-8和IFN-γ的影响不显著。2、p-伴大豆球蛋白和大豆球蛋白能够改变小肠肠道黏膜结构,使小肠绒毛高度降低、隐窝深度增加。添加2000μg/kg·W、5000μg/kg-W剂量的7S和11S能够显著降低仔猪十二指肠和空肠的绒毛高度,添加5000 μg/kg·W剂量的7S和11S能够显著降低仔猪回肠的绒毛高度,添加2000μg/kg-W、5000 μg/kg-W剂量的7S和5000 ug/kg·W剂量的11S能够显著增加十二指肠、空肠和回肠的隐窝深度。3、p-伴大豆球蛋白和大豆球蛋白可以使十二指肠、空肠和回肠紧密连接蛋白Claudin·-1表达量降低,其中添加2000 μg/kg·W、5000 μg/kg·W剂量的7S和添加5000奶仔猪回肠紧密连接蛋白Claudin-1表达量(P<0.01)。4、β-伴大豆球蛋白和大豆球蛋白能够不同程度地降低仔猪肠道紧密连接蛋白Claudin-1 mRNA相对表达量。添加2000 μg/kg·W、5000 μg/kg·W剂量的7S和11S能够显著降低仔猪十二指肠紧密连接蛋白Claudin-1 mRNA相对表达量(P<0.05或P<0.01),添加500 μg/kg-W、2000 μg/kg-W、5000 μg/kg-W剂量的7S和11S能够显著降低仔猪空肠前段紧密连接蛋白Claudin-1 mRNA相对表达量(P<0.05或P<0.01),添加5000μg/kg-W剂量的7S和11S能够显著降低空肠中段、空肠后段和回肠紧密连接蛋白Claudin-1 mRNA相对表达量。综上所述,β-伴大豆球蛋白和大豆球蛋白能够明显提高仔猪血清中IL-2、TL-4、 1L-6、IL-8含量,降低INF-7含量;饲喂大豆抗原蛋白后的仔猪小肠各段绒毛高度降低、隐窝深度增加,肠黏膜紧密连接蛋白Claudin-1及其mRNA表达量降低。
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