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背景黄芩苷是从黄芩的干燥根中提取分离出来的一种黄酮类化合物,具有多种药理作用。资料显示,黄芩苷能舒张大鼠胸主动脉平滑肌和豚鼠的离体肠管平滑肌,其机制与阻断平滑肌细胞膜上的电压依赖型钙通道和受体依赖型钙通道有关。也有文献报道黄芩苷对治疗哮喘发作有一定的疗效,具体的机制目前尚不不清楚。本实验室前期的研究结果证明黄芩苷通过调节cGMP的信号途径,进而舒张大鼠离体气管平滑肌。目的本研究通过探讨黄芩苷对大鼠气管平滑肌细胞内钙离子浓度的影响及相关机制,对黄芩苷的药理作用机制作进一步补充,为其临床应用提供相应的实验依据。方法大鼠气管平滑肌细胞的原代培养,随机分为对照组、黄芩苷组、亚甲基兰(MB)+黄芩苷组、左旋氮氨酸精氨酸甲酯(L-NAME)+黄芩苷组以及细胞外液无钙组(对照组与黄芩苷组),采用钙离子荧光探针Fluo-3/AM标记培养的平滑肌细胞内钙离子,在激光共聚焦显微镜下连续扫描；健康的成年SD大鼠20只,(雌雄不拘)随机分为对照组、黄芩苷组。颈椎脱臼法处死后迅速分离气管,黄芩苷组用终浓度8×104M黄芩苷的Krebs液37℃液孵育40mmin,对照组加等同黄芩苷量的PBS液孵育。采用免疫组化法测定诱导型一氧化氮合酶(iNOS)的表达,按照一氧化氮合酶检测试剂盒的方法测NOS的活性。所有数据用SPSS17.0统计软件进行分析。结果1.黄芩苷组细胞内Ca2+荧光强度值在5min和10mmin后分别是2492.791±5.730和1689.097±=5.202(n=10)与对照组细胞内Ca2+荧光强度值5min和l0min后3839.368±6.035和3860.163±7.607(n=10)相比明显降低(P<0.01),说明黄芩苷明显的降低了细胞内Ca2+浓度；MB+黄芩苷组细胞内Ca2+荧光强度值在5min和10min后分别是3009.596±5.296和3032.298±5.192(n=10)与黄芩苷组相比细胞内Ca2+浓度升高说明MB阻断了黄芩苷促进乌苷酸环化酶(GC)减少细胞内Ca2+的作用(P<0.01);L-NAME+黄芩苷组细胞内Ca2+荧光强度值在5min和10min后分别是3113.462±6.028和3130.269±6.114(n=10)与黄芩苷组相比细胞内Ca2+浓度升高,说明L-NAME抑制了黄芩苷促进NO合成减少细胞内Ca2+的作用(P<0.01)。2细胞外液无钙时,对数据进行统计学分析,黄芩苷组与对照组相比P>0.05,无统计学意义。表明黄芩苷是通过抑制细胞外的钙离子进入细胞内。3.对照组和黄芩苷组iNOS阳性区平均灰度值分别是114.883±6.568和155.614±5.012(n=15),有显著差异(P<0.01)。4.黄芩苷组NOS的活性为对照组的1.55±0.02倍,有显著差异(P<0.01)。结论黄芩苷明显降低大鼠气管平滑肌细胞内钙离子浓度,可能与其增强大鼠气管一氧化氮合酶的表达及活性有关。