猪精液冷冻技术的研究与应用

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猪精子结构的特殊性使其对温度变化特别敏感,在冷冻解冻过程中极易受到损伤,导致猪冷冻精液的生产难度大、操作程序复杂,极大的限制了猪冷冻精液的推广与应用。然而猪精液冷冻对提高优秀种公畜的利用率:开展濒临绝种的优良品种的保种、育种工作等都有重要的意义;另外,冻精与体外受精、人工授精技术相结合,建立高效的体外胚胎生产体系,大量生产质优、价廉、一致性好的胚胎对现代生物工程技术以及畜牧业生产的研究与发展也具有深远的现实意义。因此,深入系统地研究猪精液冷冻机理和生产的关键技术,探讨影响猪冻精活率及受精能力的因素,进一步优化猪精液冷冻方法,提高精液冷冻的效率,已成为国内外养猪生产中急待解决的问题。 本实验以解冻后的精子活率、顶体完整率和体外受精(IVF)、人工授精(AI)结果作为判定指标,探讨了稀释液配方、冷源和Equex.STM对猪精液颗粒冷冻效果的影响。手握法采集成年、健康种公猪精液,进行两步法稀释,比较了目前常用的三种稀释液配方,发现1号稀释液显著优于2、3号稀释液;分别采用添加Equex.STM的1号稀释液和普通稀释液,以干冰或液氮为冷源进行精液冷冻。结果如下:以干冰为冷源滴冻精液冻后活率为48.8±4.7%、顶体完整率为78.2±4.0%,而以液氮为冷源的方法冻后活率为33.3±5.6%、顶体完整率为55.8±6.8%,前者在这两项指标上显著优于后者(P<0.05)。另外,在稀释液中添加Equex.STM,以干冰为冷源进行滴冻,顶体完整率为79.5±2.8%,与为添加Equex.STM实验组(项体完整率为57.9±7.7%)相比,冻精顶体完整率显著提高。结合体外受精(IVF)和人工授精(AI)技术,对添加Equex.STM的稀释液、以干冰为冷源滴冻的冻精进行质量评定。通过添加10%卵泡液(PFF)和10%胎牛血清(FBS)优化卵母细胞体外成熟培养体系,然后进行IVF,其中冻精IVF卵裂率、囊胚率分别为53.2±1.3%和21.6±5.3%。利用冻精进行低剂量人工授精的尝试,以有效精子数5000万的冻精进行子宫内深部输精取得成功,窝产仔数达到6头;1亿精子子宫内深部输精,窝产仔数达到9头。以上结果表明采用添加Equex.STM的1号稀释液、以干冰冷作为冷源可以获得高质量的猪冻精。为猪精液冷冻的进一步研究及其推广与应用奠定了基础。
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