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第一部分Lowe综合征八例临床及基因分析目的分析和总结我院就诊的8例符合Lowe综合征临床诊断的患儿的临床表现及基因型特征,旨在提高对该疾病的认识。方法选择我院2011年11月至2016年6月份收治的临床诊断为Lowe综合征的8例患儿,回顾性总结、分析这些患儿的临床表现、实验室检查结果以及基因检测结果。结果该8例患儿均为男孩,均以先天性白内障为首发症状,但至发现尿检异常及确诊为Lowe综合征的时间间隔较长,为1~44月,平均(16.5±17.1)月。8例患儿除了眼部病变外,均合并有肌张力减退、运动发育迟缓、小分子蛋白尿和高钙尿的表现,都伴有生长发育落后的症状;除了上述这些表现外,2/8(2例)的患儿合并严重的先天性青光眼,7/8(7例)合并智力下降,2/8(2例)合并行为障碍表现,2/8(2例)合并惊厥表现,6/8(6例)头颅MRI结果显示异常,6/8(6例)合并氨基酸尿,2/8(2例)合并肾小管酸中毒表现,1/8(1例)合并低钾血症,2/8(2例)合并佝偻病表现,5/8(5例)合并骨质缺乏,2/8(2例)合并面部畸形。其中7例通过外显子捕获-第二代测序法行基因测序,检测结果发现6例患儿存在OCRL基因突变,分别为R361G、L423W、Q388P、N373I、R695X及I366N,包括5个错义突变及1个无义突变;1例患儿未检出OCRL基因突变,但却发现存在SLC4A1基因c.16-15G>A位点的杂合突变;除R695X外,均为之前未报到过的新突变。结论1.Lowe综合征患儿表现为以眼睛、神经系统、肾脏异常为主的多系统的病变。2.患儿多以先天性白内障等眼部病变为首发表现,但至发现尿检异常并确诊Lowe综合征的间隔时间较长,因而提早确诊时间对患儿的诊治方面可能有重要的意义。3.部分临床表现为Lowe综合征的患儿未检出合并OCRL基因突变,故推测OCRL可能不是导致Lowe综合征的唯一致病基因。第二部分CLCN5突变基因转染293细胞实验目的我院近年来收治了多例Dent病患儿,掌握了Dent病的诊治方法,现已知该病为一种伴X隐性遗传病,多数患儿由CLCN5基因突变致病,但目前发病机制仍不十分明确。在诊治过程中我们也发现2例CLCN5基因突变的Dent病患儿的表型及基因突变各不相同,1例尿蛋白水平相对不高,另1例则表现为大量蛋白尿,基因检测结果分别为CLCN5基因的IVS3-2A>G及L594fsX595突变。为进一步研究Dent病的发病机制,我们设计了一个实验来探索这两个突变基因所导致的突变效应,并在前期工作中合成了含这两个突变基因的质粒。方法利用SYBR染料法将含有2个CLCN5突变基因IVS3-2A>G和L594fsX595及CLCN5野生型基因的质粒转染至293细胞中,取这些细胞中目的基因Megalin、Cubilin、NHE3、V-H+-ATPase的mRNA,反转录为DNA,通过QPCR技术扩增并检测这4个目的基因的相对表达量。将含有2个突变基因的293细胞中上述4个目的基因的相对表达量分别与含CLCN5野生型基因的293细胞中的作对比,从而初步推断基因的突变效应。结果含有野生型CLCN5基因及IVS3-2A>G、L594fsX595突变基因的质粒成功转染至293细胞中。含IVS3-2A>G突变基因的293细胞中Megalin、Cubilin、NHE3、V-H+-ATPase基因的相对表达量与野生型相比无明显差别,差异无统计学意义(P>0.05);而含L594fsX595突变基因的293细胞中Megalin和V-H+-ATPase基因的相对表达量减少,与野生型对比差异有统计学意义(P<0.05),而Cubilin和V-H+-ATPase基因的相对表达量与野生型相比,差异无统计学意义(P>0.05)。结论1.野生型CLCN5及IVS3-2A>G、L594fsX595突变CLCN5基因成功转染至293细胞中。2.L594fsX595突变导致Megalin、V-H+-ATPase的表达量减少,可能为引起小分子蛋白尿的原因之一。