鸭病毒性肠炎(duck viral enteritis, DVE),又名鸭瘟(duck plague, DP),是鸭、鹅等多种雁形目禽类的一种急性、热性、败血性传染病。本病病原为鸭肠炎病毒(Duck enteritis virus,DEV),属于疱疹病毒科,尚未定亚科及属。疱疹病毒糖蛋白D(Glycoprotein D, gD)为病毒主要毒力蛋白,对病毒的侵入和病毒包膜及细胞膜的融合有一定的促进作用。gD蛋白参与病毒的免疫逃避机制,与胞质中的TAP结合,阻断MHCⅠ类分子的抗原呈递途径。针对gD蛋白的功能研究对进一步了解病毒感染机理有重要理论意义。本研究以鸭肠炎病毒(DEV) C-KCE株的基因组为模板,PCR扩增得到us6ORF,并对其进行了详尽的生物信息学分析,包括氨基酸同源性、编码蛋白结构等。利用原核表达系统pET30a(+)(E. coli Rosetta),获得大小约为47KDa的重组gD基因胞外区(gDw)蛋白。免疫家兔制备兔抗gDw蛋白高免血清,血清琼扩效价为1：16,中和抗体效价为1：64。经间接免疫荧光试验和Western blot分析证明此抗体针对DEVgD蛋白有良好的反应性。对实时收获的DEV感染后细胞裂解物提取总RNA,并进行RT-PCR检测gD基因转录情况。DEV感染鸭胚成纤维细胞(DEF)后2h即可检测出go基因的转录,具有Y l基因的典型转录特征。以纯化后的兔抗gDw IgG作为一抗,与病毒接种的DEF进行间接免疫荧光反应。4h核膜及核周囊泡首先开始出现特异性绿色荧光,12h以后新合成的gD广泛存在于胞浆中,72hgD集中于细胞膜上。在接种DEV的DEF培养液中添加兔抗gDw IgG,分别检测gD蛋白在病毒的吸附、侵入、细胞到细胞间的直接传播中的作用,以及对病毒体外复制的影响。结果表明,加入抗gDwIgG试验组与对照组相比,病毒侵入率及形成的噬斑大小有明显差异,但是吸附率差异不明显,说明DEV gD参与病毒侵入和病毒在细胞间传播的过程,对病毒的吸附作用无明显影响。体外添加抗gDw IgG后,致细胞病变效应延迟出现但与病毒对照组具有相似的增殖特点。