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背景肺癌是癌症相关发病率和死亡率的主要原因,占所有确诊癌症诊断的四分之一以上。由于诊断时处于晚期,多发性转移的存在使得手术切除不充分,五年生存率约为15%。NSCLC是肺癌最常见的一组(约80%),RTK的激活突变(如EGFR基因)是NSCLC中最常见的驱动突变,以EGFR为治疗靶点的TKIs是广泛应用于EGFR突变型NSCLC的一线药物。然而,对EGFR-TKIs的耐药性不可避免地会在一年内出现,极大地限制了这些药物的长期疗效。FGL1是一种特异性的肝细胞有丝分裂活性因子,最新发现在NSCLC中表达明显上调,因此本文通过观察EGFR突变的NSCLC细胞株PC9耐药前后FGL1表达变化,探索降低耐药细胞株PC9/GR中FGL1表达后对吉非替尼敏感性变化及影响PC9/GR细胞侵袭迁移的潜在机制,为NSCLC细胞的再致敏和改善治疗效果提供一定实验依据。目的:研究FGL1在PC9细胞和PC9/GR细胞中FGL1的表达差异,探讨FGL1表达对肺腺癌细胞PC9/GR对吉非替尼敏感性影响,研究FGL1与PC9/GR细胞迁移和侵袭潜在关系和可能机制。方法:(1)CCK-8实验检测PC9细胞和PC9/GR细胞对吉非替尼的敏感性差异和IC50值;(2)Western blot实验和q RT-PCR法检测PC9细胞和PC9/GR细胞中FGL1蛋白和m RNA的表达差异;(3)采用si RNA转染细胞,沉默PC9/GR细胞FGL1基因,q RT-PCR和Western blot法确定干扰效果;(4)划痕实验、Transwell小室实验检测细胞迁移侵袭能力;(5)Western blot法检测细胞中的Zeb1、Vimentin和E-cadherin表达量。结果:(1)CCK-8结果显示,在吉非替尼的作用下PC9细胞和PC9/GR细胞存活率随着吉非替尼浓度的增加而逐渐降低,吉非替尼对PC9细胞的抑制作用强于PC9/GR细胞;PC9细胞和PC9/GR细胞的IC50值分别为(1.513±1.296)umol/L和(19.179±1.091)umol/L(P<0.01)。(2)Western blot实验和q RT-PCR结果显示PC9/GR细胞中FGL1蛋白和m RNA的表达水平明显高于PC9细胞。(3)si RNA干扰效果经Western blot显示FGL1蛋白的水平分别降低到Con组的(0.579±0.005)倍、(0.593±0.039)倍和(0.495±0.180)倍(P<0.05);经q RT-PCR显示FGL1 m RNA的表达水平分别下降至Con组的(0.135±0.026)倍、(0.152±0.054)和(0.217±0.052)倍(P<0.05)。(4)降低PC9/GR细胞中FGL1的表达水平后,经CCK-8检测发现吉非替尼作用于PC9/GR细胞Con组、NC组及Fi组后,对细胞增殖的抑制作用随着浓度的增加而逐渐增强;与Con组、NC组比较,吉非替尼对Fi组细胞的抑制作用明显增强(P<0.01);Fi组、Con组与NC组对的IC50分别为(1.967±1.147)μmol/L、(19.179±1.091)μmol/L和(20.7543±2.7348)μmol/L(P<0.01)。(5)划痕实验检测表明,Fi组与Con组比较,PC9/GR细胞迁移至划痕口的细胞明显减少,划痕间距宽(P<0.01);G+Fi组细胞与G组、Fi组和Con组比较,迁移至划痕口的细胞减少更加显著,划痕间距最宽(分别P<0.01,P<0.01,P<0.01)。G组与Con组比较差异无统计学意义(P>0.01)。(6)Traswell小室迁移实验中,Fi组与Con组比较,迁移在小室膜底部的细胞数减少(分别P<0.05,P<0.05);G+Fi组与F组、G组及Con组比较迁移在小室膜底部的细胞数减少更加明显(分别P<0.05,P<0.05,P<0.01)。(7)Traswell小室侵袭实验中,与Con组比较,吉非替尼能抑制PC9/GR细胞的侵袭(P<0.05);单独经FGL1基因敲除或与吉非替尼联合应用均可显著减少室管膜基底细胞的侵袭(分别P<0.05,P<0.01)。(8)Western blot结果显示,Fi组相对于Con组、NC组和G组,Zeb1、Vimentin表达降低而E-cadherin表达增加,以G+Fi组Zeb1、Vimentin表达降低而E-cadherin表达增加更为显著(P<0.01);G组与Con组比较FGL1蛋白表达明显升高(P<0.01)。结论:FGL1表达水平在PC9/GR细胞中表达显著升高,可能与PC9/GR细胞对吉非替尼的继发耐药相关;降低FGL1的表达可增加PC9/GR细胞对吉非替尼的敏感性,其机制是通过阻碍细胞EMT过程来抑制PC9/GR细胞的侵袭和迁移。