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目的硅油目前广泛用于治疗复杂孔源性视网膜脱离,特别是增生性玻璃体视网膜病变(PVR)。但眼内长期放置硅油可引起许多并发症,其中大多与硅油乳化有关。有报道发现硅油乳化患者中有视网膜下膜的形成,视网膜色素上皮(retinal pigment epithelium, RPE)细胞也有增殖;乳化硅油可能刺激膜形成和PVR反应,但详细的研究报告不多。本实验的目的是(1)利用膜乳化技术制备乳化硅油,为细胞学实验提供适宜的乳化硅油小滴;(2)观察乳化硅油小滴及血清对人RPE细胞增生及移行活性的影响,以及RPE细胞对硅油小滴的吞噬情况。方法1.使用微孔膜,孔径分别为0.2μm和0.45μm,在一定的压强下使硅油通过微孔膜,分散于磷酸缓冲液(PBS)中,光学显微镜观察硅油小滴大小,测定硅油小滴平均粒径。2.吞噬实验:将制备的硅油小滴用酞箐蓝标记。加入人RPE细胞培养液中,伴或不伴有血清,孵育24 h。在显微镜下计数被细胞内吞的硅油小滴。3.嗜银蛋白分析实验:培养的人RPE细胞与硅油小滴,伴或不伴有血清,共同孵育24h,进行嗜银蛋白分析,计数银染颗粒数量,观察硅油小滴及血清对RPE细胞增殖活性的影响。4.移行实验:应用人RPE细胞爬片划痕损伤模型,加入硅油小滴,伴或不伴有血清,共同孵育72h,计数进入缺损区的细胞。结果1.在3个大气压作用下,0.2μm和0.45μm微孔膜制得的硅油小滴粒径分别为2.33±0.618μm和4.63±0.833μm。2.在1个大气压下,用孔径为0.45μm的微孔膜制得的硅油小滴粒径为4.25±0.77μm,酞箐蓝可示踪硅油小滴。RPE细胞吞噬硅油小滴的数量有明显剂量依赖性,随乳化小滴浓度增高,吞噬数量也增加。乳化硅油小滴浓度为50.0mL/L时,细胞内吞平均数量为35.93±3.28个;而加有100mL/L新生牛血清组,则为40.27±4.34个(P<0.05)。3.硅油小滴对人RPE细胞增殖活性有刺激作用。加入硅油小滴的人RPE细胞核内核仁组成区嗜银蛋白染色(AgNORs)颗粒的平均数量与对照组有显著差异(P<0.01),但各硅油浓度间差异不显著(P>0.1)。硅油浓度为12.5mL/L时,细胞核内AgNORs颗粒的平均数量为2.8±0.63个,(对照,1.6±0.60个;P<0.01);在加有100mL/L新生牛血清组则为4.3±0.92个,(对照,2.3±0.65个;P<0.01)。4.较高浓度硅油小滴可抑制人RPE细胞的移行,且呈浓度依赖性。硅油小滴浓度为50.0mL/L时,细胞平均移行数量为10.6±3.03个,(对照,69.9±9.88个;P<0.001);加有100mL/L新生牛血清时,则为13.2±3.79个,(对照,91.0±12.99个;P<0.001)。结论1.用微孔膜制得硅油小滴颗粒大小易控制,粒径均匀。本实验证明用0.45μm孔径的微孔膜所制硅油小滴适宜作细胞学实验研究。2.乳化硅油小滴能刺激人RPE细胞的吞噬活性,而且这种刺激作用呈浓度依赖性,能刺激人RPE细胞增殖,较高浓度的乳化硅油小滴抑制人RPE细胞的移行。创新点1.首次报告利用膜乳化法制备乳化硅油小滴。2.首次利用酞箐蓝标记乳化硅油,利用细胞内硅油小滴颗粒计数的方法观察人RPE细胞的吞噬能力,并观察乳化硅油小滴对人RPE细胞增生和移行的影响。