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目的:1.建立大鼠脊髓半横断损伤模型2.探讨Bo NT/A HC对大鼠脊髓损伤后局部蛋白组学的干预作用3.探讨Bo NT/A HC对大鼠脊髓损伤后选择性生长相关蛋白表达的影响4.探讨Bo NT/A HC对脊髓损伤后神经突起生长的作用5.探讨Bo NT/A HC对脊髓损伤后后肢功能的影响方法:1.在显微镜下用眼科精细镊以脊髓正中静脉为界限,横向夹断左侧脊髓复制大鼠脊髓半横断损伤模型,同时在损伤即刻局部注射和依据实验不同时间点每周经皮鞘内注射给与Bo NT/A HC治疗;2.取正常腰膨大处脊髓组织和单纯脊髓损伤2天组和Bo NT/A HC治疗2天组中损伤一侧局部1cm脊髓组织进行双向电泳(2-DE)和银染色确定Bo NT/A HC对脊髓损伤后局部蛋白表达的影响;3.取正常腰膨大处脊髓组织和单纯脊髓损伤2天组和Bo NT/A HC治疗2天组中损伤一侧局部1cm脊髓组织利用同位素标记的相对和绝对定量(i TRAQ)技术和液相色谱联合串联质谱(LC-MS/MS)检测各组中差异表达蛋白,同时对所鉴定的差异表达蛋白进行生物信息分析;4.基于以上蛋白组学技术分析,通过蛋白印记技术对实验不同时间点(正常、2天、7天、14天及28天)损伤一侧局部脊髓组织中选择性生长相关蛋白进行验证,同时检测Bo NT/A HC对脊髓损伤后选择性生长相关蛋白的干预作用;进一步采用免疫荧光技术确定各实验组中选择性生长相关蛋白的分布特点;5.对损伤灶周围神经突起长度进行测量,同时计数突起数目及具有突起细胞占所有阳性突起所占百分比;6.抓力测定和热痛敏实验评估后肢运动和感觉功能。结果:1.单侧腰段脊髓横断损伤模型大鼠呈现明显的运动及感觉功能障碍。2.双向电泳结果表明SCI后给予Bo NT/A HC可影响损伤局部蛋白表达的变化,单纯脊髓损伤时,脊髓损伤局部蛋白会出现升高会降低的趋势,但是,在给予Bo NT/A HC干预治疗后,SCI后损伤局部脊髓蛋白点群在变化的基础上逆转或表达进一步增加,尤以MW位于35~45k Da及18~25k Da、等电点在4~7范围的蛋白点表现明显。3.i TRAQ技术及生物信息学分析共发现2864种蛋白质,动态变化蛋白477种。单纯损伤组与对照组相比有146个差异表达蛋白,其中,92个为上调蛋白,54个为下调蛋白;Bo NT/A HC治疗组(2天)和对照组相比有300个差异表达蛋白:199个上调、101个下调;Bo NT/A HC治疗组与单纯损伤组相比,188个差异表达蛋白中:110个上调和78个下调。生物信息分析结果显示,在这些差异表达蛋白质中包含数种与神经再生及神经保护相关的蛋白质,例如:生长相关蛋白43(GAP 43)、载脂蛋白E(Apo E)、整合素、S100蛋白、热休克蛋白、胶质纤维酸性蛋白(GFAP),髓鞘少突胶质细胞糖蛋白(OMgp)等。4.蛋白印迹及免疫荧光结果提示:不论Bo NT/A HC给药时间长短,在实验观察阶段,Bo NT/A HC治疗组中磷酸化GAP-43(p-GAP 43)及SCG 10的表达水平都显著高于单纯损伤组,差异具有统计学意义(P(27)0.05);p-GAP 43和SCG 10阳性细胞主要分布于损伤周边,除胞体阳性外,p-GAP 43和SCG 10的阳性染色也出现于细胞突起,尤以损伤头端较为显著;相比较而言,单纯损伤组的p-GAP43和SCG 10免疫荧光阳性主要分布于细胞体。5.SCG 10阳性神经突起测定结果提示:Bo NT/A HC用药组脊髓损伤周边SCG10阳性神经元突起明显增长,除此外神经突起数目及及具有SCG 10阳性突起的神经细胞百分比均有所增多(P(27)0.05)。6.Bo NT/A HC对大鼠损伤后的运动功能有一定促恢复作用,但感觉功能测定指标(热痛敏试验)未见明显变化。结论:1.Bo NT/A HC可影响大鼠SCI后损伤局部脊髓蛋白的表达,其中包括一些与神经再生及神经保护作用相关的蛋白质。2.Bo NT/A HC可促进SCI后生长相关蛋白p-GAP 43和SCG 10的表达,由此而参与促进脊髓损伤周围神经突起的再生延长,有利于脊髓损伤侧后肢运动功能的恢复。