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目的:探究PD-1和PD-L1在调节人高分化食管鳞状细胞癌细胞株Eca109以及人低分化食管鳞状细胞癌细胞株EC9706细胞增殖、迁移和侵袭中的作用。探寻PD-1/PD-L1与AKT通路之间的联系,同时探索它们是否会影响细胞周期相关蛋白P21、PLK4的表达。方法:1.将食管鳞状细胞癌(Esophageal squamous cancer,ESCC)细胞株Eca109和EC9706细胞分成阴性对照组、空载组及实验组(转染PD-1过表达质粒以及PD-L1的SiRNA),利用脂质体法将PD-L1-siRNA(siPD-L1)和PD-1过表达质粒(PD-1-cDNA)作为实验组,siRNA-Control(SiCtr)和空载质粒(SiVector)作为空载组瞬时转染ESCC细胞株Eca109以及EC9706。2.荧光显微镜观察转染成功后,适时终止转染。3.Western Blot检测PD-1和PD-L1蛋白在各组ESCC细胞中的表达差异。4.Real-time PCR在基因水平检测过表达PD-1和降表达PD-L1后对AKT通路以及细胞周期蛋白P21和PLK4的影响。5.检测过表达PD-1和降表达PD-L1后对Eca109和EC9706细胞株细胞增殖能力的影响(CCK-8增殖实验)。6.检测过表达PD-1和降表达PD-L1后对Eca109和EC9706细胞株细胞迁移能力的影响(细胞划痕实验和Transwell小室迁移实验)。7.检测过表达PD-1和降表达PD-L1后对Eca109和EC9706细胞株细胞侵袭能力的影响(Transwell小室侵袭实验)。结果:1.Western blot结果显示:PD-1过表达组,PD-1蛋白的表达高于阴性对照组及空载组,差异具有统计学意义(P<0.01);PD-L1降表达组,PD-L1蛋白的表达低于阴性对照组及空载组,差异具有统计学意义(P<0.01)。空白组与空载之间比较差异无统计学意义。2.Real-time PCR结果显示:PD-1过表达组中PD-1的mRNA的表达量显著高于阴性对照组及空载组(P<0.01),而PD-L1降表达组中PD-L1的mRNA的表达量显著低于阴性对照组及空载组(P<0.01),空白组与空载体之间差异无统计学意义。PD-1过表达组中与PD-L1降表达组中,AKT的mRNA的表达量与空白组和空载体组之间差异有统计学意义(P<0.05)。PLK4与P21的mRNA的表达量与空白组和空载体组之间差异无统计学意义。3.在CCK-8细胞增殖实验,Transwell小室迁移实验,细胞划痕实验和Transwell小室侵袭实验中,PD-1过表达组的细胞增殖、迁移以及侵袭能力明显高于阴性对照组和空载组(P<0.01)。PD-L1降表达组的细胞增殖,迁移以及侵袭能力明显低于阴性对照组和空载组(P<0.01),后两组之间无明显差异。结论:1.Real-time PCR结果表明食管鳞状细胞癌细胞株Eca109与EC9706过表达PD-1后可能激活了AKT信号通路,两株细胞株降表达PD-L1后可能抑制了AKT信号通路。但PD-1的过表达以及PD-L1的降表达均不能改变下游相关蛋白P21和PLK4的表达。2.过表达PD-1后促进食管鳞癌细胞增殖、迁移和侵袭能力。降表达PD-L1后抑制食管鳞癌细胞增殖、迁移和侵袭能力。