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依据烟草花叶病毒(Tobacco mosaic virus，TMV)外壳蛋白(CP)基因序列(480nt)片段设计合成了一对引物，以病毒粗提RNA为模板，通过反转录—聚合链式反应(reverse transcription polymerase chain reaction，RT-PCR)扩增得到长度为442bp的目的片段。将目的片段连接pGET-easy质粒，转入大肠杆菌(E.coli)并进行测序。序列测定结果与中国云南TMV分离物AJ239099的同段CP基因序列比较，发现核苷酸同源性可达99.8％，证明成功地得到了TMV该段CP基因。依据TMVCP基因对其不同分离物间分子差异进行分析。结果表明，TMV CP核苷酸序存在很大差异，同源性在73.1-100％之间。根据TMV CP基因序列同源性建立了TMV系统进化树并对TMV不同分离物进行了类型分析。 根据黄瓜花叶病毒(Cucumber mosaic virus，CMV)外壳蛋白基因序列(657nt)及其后一段非编码区设计合成了一对特异引物，以带毒烟草总RNA为模板，通过RT-PCR扩增得到了长度为776bp的目的片段。将目的片段连接pGET-easy质粒，转入大肠杆菌后进行测序。序列测定结果与美国AF523342的核苷酸同源性为98.6％，证明成功地得到了CMV CP基因。依据CMV CP基因核苷酸序列同源性建立CMV系统进化树，结果表明CMV可明显分为两大亚组，对其亚组Ⅰ不同分离物进一步进行分子差异分析，发现其间差异较大，同源性在90.3—98.6％之间。 根据马铃薯Y病毒(Potato virus Y, PVY)CP基因序列(804nt)设计合成了其特异引物，以带毒烟草总RNA为模板，RT-PCR法扩增得到了长度为808bp的目的片段。将目的片段连接pGET-easy质粒，转入大肠杆菌并进行测序。序列测定结果与其他PVYCP基因序列比较，北京、青州和沈阳PVY分离物与类型Ⅲ其他分离物的核苷酸序列同源性分别为93.4-96.6％、92.0-94.0％、91.9-94.0％。依据PVY不同分离物的CP基因核苷酸序列同源性建立了PVY系统进化树。 利用病毒的特异性引物，对TMV、CMV、PVY进行了一步RT—PCR检测，并以获得的各自的重组质粒为模板，PCR法合成了地高辛标记的核酸探针，建立了三者的核酸斑点杂交检测技术(Nucleic acid spot hybridization，NASH)。一步RT—PCR检测技术较常规RT-PCR方法更加快捷，NASH检测技术经改进，在不影响检测效果的情况下，达到了简便快速且成本降低的目的，使每个样品的检测成本降至约0.4元，此方法更适合大量样品的检测。 依据这三种病毒检测技术的研究结果，设计组装了烟草主要三种病毒的NASH检测试剂盒，使病毒检测更为方便和快捷。