小麦条锈菌稳定遗传转化体系的初探

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小麦条锈病是由条形柄锈菌小麦专化型(Puccinia striiformis f.sp.tritici)引起的一种叶部上的气传性病害,是世界范围内严重危害小麦生产的专性寄生真菌病害。小麦条锈菌属于担子菌门,是一种严格的专性活体营养寄生病原真菌,无法在人工培养基上生长完成其生活史。随着小麦条锈菌基因组测序的完成,小麦条锈菌生物学进入了功能基因组时代,对能够进行大规模功能基因组研究的工具的需求明显增加。然而,遗传转化技术是一个强有力的工具,可以便于人类进一步分离基因和分析基因功能。因此,建立一套适用于基因功能分析的稳定遗传转化体系对深入开展小麦条锈菌的功能基因组学研究显得尤为迫切。本研究选择小麦条锈菌的内源稳定表达基因β-tubulin的启动子作为转化载体的启动子,报告基因选择单体分子且稳定的mCherry荧光标记,筛选标记选择β-tubulin和Bar基因,构建了一系列转化载体。然后,通过离体叶片培养方法摸索了后期筛选转化菌株所用药剂的浓度。在该研究中,我们进行了基因枪轰击法和农杆菌介导转化法进行小麦条锈菌稳定遗传转化体系的初步探索。本研究取得的研究结果如下:(1)该研究分别构建了基因枪法和农杆菌介导法的转化载体,都是由小麦条锈菌β-tubulin基因的内源启动子驱动的以mCherry荧光蛋白为报告基因、β-tubulin基因或Bar基因为筛选标记的遗传转化载体;(2)在药剂筛选上初步选择了药效柔和的苯菌灵,同时在离体叶片上进行了不同浓度的筛选实验,确定后期将选用75μg/μL作为筛选浓度;(3)尝试了基因枪轰击法,获得了一批检测呈阳性、外源标记基因可能成功插入条锈菌基因组的转化后代。
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